依达拉奉对大鼠脑出血后神经细胞凋亡及Caspase-3、PARP-1表达影响的实验研究

发布时间：2017-10-30 12:16

  本文关键词：依达拉奉对大鼠脑出血后神经细胞凋亡及Caspase-3、PARP-1表达影响的实验研究

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【摘要】：目的:通过大鼠断尾取血注入尾状核的自体血注入法建立脑出血模型,并给予以依达拉奉治疗,观察不同剂量的依达拉奉对大鼠脑出血后神经功能评分、脑组织中细胞凋亡和半胱氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartate-specific proteinase-3,Caspase-3)、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1[poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1)]表达的影响,探讨依达拉奉改善脑出血后继发性脑损伤的机制,进一步为依达拉奉治疗脑出血提供实验依据。方法:将体重在250g-300g之间的健康成年雄性SD大鼠80只随机分成假手术组(5只)、ICH组(25只)、小剂量治疗组以下简称小剂量组(25只)和大剂量治疗组以下简称大剂量组(25只)四组,其中假手术组大鼠在造模过程中只插针但是不注入自体血,仅设术后6h时间点;ICH组、小剂量治疗组和大剂量治疗组每组分别采取术后6h、24h、2d、3d和5d这5个时间点观察并处死大鼠,每个时间点5只大鼠;实验采用大鼠断尾取血自体血注入右侧尾状核的方法建立大鼠脑出血模型,小剂量治疗组按体重1mg/Kg、大剂量治疗组按体重3mg/Kg(均用生理盐水稀释至2 ml)术后立即给予依达拉奉腹腔注射,每12h注射1次,直到处死前12h,ICH组大鼠在术后同时间给予腹腔注射同剂量的生理盐水,假手术组术中不注入自体血,术后立即腹腔注射同剂量生理盐水;脑出血术后2h后判断造模是否成功,观察模型成功的大鼠并于实验设计的术后5个时间点对大鼠进行神经功能障碍评分;按时间点处死大鼠后,立即断头开颅取脑组织,在脑出血血肿周围组织中分别测定脑组织含水量(干湿法)、caspase-3及parp-1表达阳性的细胞(免疫组织化学染色)、凋亡细胞(tunel染色)以及进行病理染色(he染色)。结果:1.大鼠脑出血术后,ich组大鼠6h后就开始出现不同程度神经功能障碍,出血灶周围脑组织含水量增加,随时间的延长,两者均在2-3d达高峰;凋亡细胞数目也增加,在第3d时凋亡细胞数目最多;he染色显示脑出血病灶侧血肿脑组织有出血后病理改变的表现,且在3d时病理改变最重。2.脑出血后caspase-3、parp-1的动态变化:脑出血术后6h开始caspase-3表达较假手术组增多,3d达高峰,以后逐渐下降,到第5d仍有较高表达,与各时间点与假手术组均有统计学差异(p0.05),parp-1的表达显示同样规律。3.依达拉奉对上述指标的影响:(1)脑出血术后,两个治疗组大鼠神经功能评分较ich组大鼠评分明显升高,小剂量治疗组在24h至5d各个时间点与ich组比较即有统计学差异(p0.05),大剂量治疗组在术后6h至5d各个时间点与ich组比较就有统计学意义(p0.05),大剂量治疗组在术后24h至5d后的各个时间点与小剂量治疗组比较评分均升高,都有统计学差异(p0.05);(2)大、小剂量治疗组术后血肿周围脑组织含水量术后6h至5d各个时间点与ich组比较有所减轻有统计学差异(p0.05),大剂量治疗组在术后6h至5d各时间点与小剂量治疗组比较脑组织含水量降低,有统计学差异(p0.05);(3)he染色:大、小剂量治疗组出血周围脑组织神经细胞坏死、细胞充血水肿及白细胞浸润程度在6h至5d各时间点均较ICH组减轻,大剂量治疗组在术后6h至5d各时间点与小剂量治疗组比较脑组织病理改变程度减轻更明显;(4)脑出血术后,大、小剂量治疗组血肿周围脑组织中Caspase-3及PARP-1表达在6h至5d各时间点较ICH组明显下降,有统计学差异(P0.05),大剂量治疗组在术后6h至5d各时间点与小剂量治疗组比较Caspase-3及PARP-1表达水平降低,有统计学差异(P0.05);(5)大、小剂量治疗组血肿周围脑组织中凋亡细胞数在术后6h至5d各时间点较ICH组明显下降,有统计学差异(P0.05),大剂量治疗组在术后6h至5d各时间点与小剂量治疗组比较凋亡细胞数目均降低,有统计学差异(P0.05)。结论:1.自体血注入法制作大鼠脑出血模型方法较简单,成功率较高,更易于操作,与临床上人体自发性脑出血的病理变化过程相似,是比较理想的研究脑出血的动物模型。2.脑出血后Caspase-3蛋白表达增高并促进PARP-1蛋白的表达,会加重脑水肿及脑组织病理改变程度,导致神经功能障碍加重,促进细胞凋亡,从而加重出血后继发性脑损伤。3.脑出血后立即给予依达拉奉治疗可以抑制Caspase-3及PARP-1的表达,减少出血后神经细胞凋亡,减轻脑水肿和脑组织病理改变程度,提高神经功能评分,对继发性脑损伤发挥保护作用。4.依达拉奉在治疗脑出血中的神经保护作用随剂量增加而增加,大剂量依达拉奉作用优于小剂量。
【关键词】：依达拉奉 脑出血 细胞凋亡 PARP-1 Caspase-3
【学位授予单位】：四川医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.34
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-12
• 前言12-15
• 材料与方法15-24
• 结果24-41
• 讨论41-51
• 结论51-52
• 参考文献52-58
• 英汉缩略词对照表58-59
• 致谢59-60
• PARP-1 在脑血管疾病中的作用及机制（综述）60-71
• 参考文献67-71

【参考文献】

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1 陈达;刘艳;朱杰;王斯闻;;依达拉奉对脑出血大鼠神经保护作用的实验研究[J];中国现代医学杂志;2009年04期

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本文编号：1117649