不同机制细胞毒性药物对人少突胶质细胞系α-突触核蛋白表达的影响

发布时间：2017-11-19 02:02

  本文关键词：不同机制细胞毒性药物对人少突胶质细胞系α-突触核蛋白表达的影响

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【摘要】：目的： 多系统萎缩（MSA）的病因和发病机制不明，，可能由多种遗传和环境因素相互作用引起。研究报道环境中的有毒物质可致病，病理显示胶质细胞的广泛改变，包括少突胶质细胞胞浆包涵体（GCIs）的形成。GCIs为多系统萎缩特征性病理表现，是确诊该病的重要病理标志物。GCIs的主要成分为α-突触核蛋白。许多研究提示α-突触核蛋白在神经系统变性疾病的发病过程中起着重要作用。目前，GCIs中α-突触核蛋的来源及少突胶质细胞内α-突触核蛋的聚集机制尚不明确。本研究通过体外细胞实验观察不同机制细胞毒性药物对少突胶质细胞内α-突触核蛋白表达的影响，探讨多系统萎缩可能的发病机制。 方法： 本研究选用人类少突胶细胞系MO3.13细胞为研究对象，利用噻唑蓝（MTT）法测定不同浓度细胞毒性药物3-硝基丙酸（3-NP）、3-甲基腺嘌呤（3-MA）、H2O2对MO3.13细胞存活率的影响，筛选合适的药物浓度。将实验分为4组：正常对照组、5mM3-NP组、2mM3-MA组、1mM H2O2组，孵育细胞24小时，利用Western blot方法测定MO3.13少突胶质细胞内α-突触核蛋白表达水平的变化，筛选阳性组。阳性组不同药物浓度孵育MO3.13少突胶质细胞24小时，利用Western blot方法、实时荧光定量PCR方法、免疫荧光细胞化学染色方法等测定MO3.13少突胶质细胞内α-突触核蛋白、SNCA mRNA的表达。 结果： 1、MTT结果示，3-NP组、3-MA组、H2O2组的细胞存活率分别随药物浓度的增加而递减，呈浓度依赖性减少（P0.05）。 2、Western blot结果示，三组不同药物处理组中，3-NP组与对照组相比明显增加（34%）MO3.13细胞内α-突触核蛋白表达。3-NP组的细胞存活率降低与MO3.13细胞内α-突触核蛋白表达增加呈正相关。3-MA组、H2O2组的α-突触核蛋白表达与对照组相比无明显差异。 3、不同浓度3-NP处理MO3.13细胞24小时后，分别进行Westernblot、实时荧光定量PCR检测，结果示MO3.13细胞内α-突触核蛋白和SNCA基因mRNA表达分别呈浓度依赖性增加（P0.05）。免疫组织细胞染色结果示，与对照组相比较，10mM3-NP组明显增加MO3.13细胞内α-突触核蛋白的表达（P0.05）。 结论： 1、3-NP、3-MA、H2O2均可抑制人少突胶质细胞系MO3.13细胞的增殖，对细胞有毒性作用。3-NP组细胞存活率的降低可能与α-突触核蛋白表达增加有关。 2、线粒体复合体II不可逆性抑制剂3-NP可使MO3.13少突胶质细胞内α-突触核蛋白和SNCA mRNA表达量增加。 3、线粒体功能损伤机制参与少突胶质细胞内α-突触核蛋白的表达及聚集过程，该机制可能涉及多系统萎缩发病过程。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R741

【共引文献】

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本文编号：1201897