新生期惊厥脑损伤中惊厥急性期瘦素干预作用及机制初探

发布时间：2017-12-04 23:18

  本文关键词：新生期惊厥脑损伤中惊厥急性期瘦素干预作用及机制初探

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【摘要】：目的:探讨惊厥急性期瘦素干预对三氟乙醚诱导新生期大鼠长程反复惊厥远期神经行为、学习记忆能力损伤的影响和分子机制。方法:7日龄(P7)的Sprague-Dawley(SD)大鼠共40只,随机分为四组(n=10只/组),即:单纯对照组(CON组)、瘦素对照组(CON+LEP组)、单纯惊厥组(RS组)及瘦素惊厥组(RS+LEP组)。CON组每日予正常喂养;RS组喂养同CON组,另连续7日,每日吸入三氟乙醚诱发惊厥发作一次,一次持续30min;RS+LEP组操作同RS组,但在每日惊厥后一小时腹腔注射4mg/kg瘦素;CON+LEP组除不吸入三氟乙醚外,操作同RS+LEP组。于P23、P30分别进行神经行为学评分(平面翻正反射测试、悬崖回避反射测试、负向趋地反射测试、前肢悬吊测试)。于P23、P30分别进行旷场实验测试。于P27-P33期间行Morris水迷宫测试。于P34取脑组织标本,用Neo-Timm’s染色法检测海马苔藓纤维发芽情况,免疫蛋白印迹技术检测大脑皮层及海马Beclin-1、Beclin-1/Bcl-2比值、Cathepsin E、P53的表达。结果:1.神经行为学评分显示:RS组(P23、P30)平面反正反射、悬崖回避反射、负向趋地反射时间较CON组明显延长(P�d0.05);RS+LEP组(P23、P30)平面反正反射、悬崖回避反射、负向趋地反射时间趋于正常,较RS组有统计学差异(P�d0.05)。RS组(P23、P30)前肢悬吊时间较CON组明显缩短(P�d0.05);RS+LEP组(P23)前肢悬吊时间趋于正常,较RS组有统计学差异(P�d0.05)。2.旷场实验显示:(1)RS组(P23、P30)延迟时间较CON组明显延长(P0.05);RS+LEP组(P23、P30)延迟时间趋于正常,较RS组有统计学差异(P0.05)。(2)RS组(P23、P30)水平得分较CON组明显降低(P0.05);RS+LEP组(P23、P30)水平得分趋于正常,较RS组有统计学差异(P0.05)。(3)RS组(P23、P30)垂直得分较CON组明显降低(P0.05);RS+LEP组(P23、P30)垂直得分趋于正常较RS组有统计学差异(P0.05)。(3)RS组(P23、P30)开场得分较CON组明显降低(P0.05);(4)RS+LEP组(P23、P30)开场得分趋于正常,较RS组有统计学差异(P0.05)。3.Morris水迷宫实验显示:(1)逃避潜伏期:从P28至P32,四组大鼠逃避潜伏期逐渐缩短,RS组(P29、P30、P31、P32)逃避潜伏期较CON组明显延长(P�d0.05);RS+LEP组逃避潜伏期趋于正常,较RS组有统计学差异(P�d0.05)。(2)空间探索测试:RS组(P34)穿越平台次数较CON组明显减少(P�d0.05);RS+LEP组(P34)穿越平台次数趋于正常,较RS组有统计学差异(P�d0.05)。4.Neo-Timm’s染色结果显示:RS组CA3区及海马齿状回苔藓纤维发芽程度较CON组明显增加(P�d0.05);RS+LEP组CA3区及海马齿状回苔藓纤维发芽程度趋于正常,较RS组有统计学差异(P�d0.05)。5.Western blot结果显示:(1)RS组皮层组织中Beclin-1、Beclin-1/Bcl-2、Cathepsin E、P53表达量较CON组明显增高(P�d0.05);RS+LEP组皮层组织中Beclin-1、Beclin-1/Bcl-2、Cathepsin E、P53表达量趋于正常,较RS组有统计学差异(P�d0.05)。(2)RS组海马组织中Beclin-1、Beclin-1/Bcl-2、Cathepsin E、P53表达量较CON组明显增高(P�d0.05);RS+LEP组海马组织中Beclin-1、Beclin-1/Bcl-2、Cathepsin E表达量趋于正常,较RS组有统计学差异(P�d0.05)。结论:1.急性期瘦素干预,能显著改善新生期长程反复惊厥所致远期神经行为及学习记忆能力损伤,抑制海马齿状回及CA3区苔藓纤维异常发芽,具有神经保护作用。2.急性期瘦素干预可抑制新生期惊厥所致远期海马和大脑皮层自噬信号通路相关蛋白Beclin-1、Beclin-1/Bcl-2、Cathepsin E、P53的过表达。3.本研究提示:惊厥急性期瘦素干预可能以自噬信号通路为靶点发挥神经保护作用。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R720.597;R742

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本文编号：1252724