构建M23-AQP4稳定表达的HEK293细胞应用于血清抗AQP4抗体检测的研究

发布时间：2017-12-09 04:26

  本文关键词：构建M23-AQP4稳定表达的HEK293细胞应用于血清抗AQP4抗体检测的研究

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【摘要】：目的构建M23-AQP4稳定表达HEK293细胞(HEK293-M23-AQP4)并用于抗AQP4抗体检测,以探索临床可行的抗AQP4抗体检测方法。方法用磷酸钙转染试剂将pEGFP-N1-M23-AQP4质粒转入HEK293细胞,通过G418筛选HEK293-M23-AQP4,以细胞间接免疫荧光法(CBA)检测M23-AQP4表达及分布。以HEK293-M23-AQP4为底物的CBA法检测视神经脊髓炎(NMO)6例、多发性硬化(MS)16例、其他脱髓鞘疾病(视神经炎、脊髓炎、吉兰-巴雷综合征、急性播散性脑脊髓炎)30例、非脱髓鞘性疾病患者10例血清抗AQP4抗体及其滴度,并比较4组抗体阳性率,计算抗AQP4抗体诊断NMO的敏感性,分别以非NMO的脱髓鞘疾病和非脱髓鞘疾病作对照计算抗AQP4抗体诊断NMO的特异性。将HEK293-M23-AQP4细胞于室温、4℃、-20℃保存4周,分别作为底物检测经首次检测所得抗AQP4抗体阳性标本并随机选取5例抗体阴性标本的抗AQP4抗体及滴度,比较其阳性率及滴度变化;将上述首次检测所得抗AQP4抗体阳性标本及5例抗体阴性标本反复冻融3次后分别于室温、4℃、-20℃保存1周后,检测其抗AQP4抗体及滴度,比较阳性率和滴度变化。结果 HEK293-M23-AQP4构建成功,M23-AQP4主要表达在细胞膜上。NMO患者抗AQP4抗体阳性率达83.3%(5/6),显著高于MS患者〔6.3%(1/16)〕、其他脱髓鞘疾病〔3.3%(1/30)〕和非脱髓鞘性疾病〔0.0%(0/10)〕(均P0.01);抗AQP4抗体诊断NMO的敏感性为83.3%(5/6),以非NMO的脱髓鞘疾病作对照时,其诊断NMO特异性为95.6%(44/46),以非脱髓鞘疾病作对照时,其诊断NMO特异性为100%(10/10)。HEK293-M23-AQP4于不同温度保存后所检测抗AQP4抗体阳性率和滴度与首次检测比较均无统计学意义(均P=1.0)。血清标本4℃及-20℃保存1周后所检测抗AQP4抗体阳性率和滴度与首次检测比较差异均无统计学意义(均P=1.0);室温保存1周后抗体滴度(1∶400、1∶400、1∶3200、1∶6400、1∶6400、1∶12800、1∶51200)与首次检测(1∶800、1∶1600、1∶12800、1∶25600、1∶25600、1∶51200、1∶120400)比较均显著下降(均P0.01),但阳性率差异无统计学意义(P=1.0)。结论成功构建HEK293-M23-AQP4细胞。以此细胞为底物的CBA法检测血清抗AQP4抗体对诊断NMO的敏感性和特异性较高,且对标本存储条件要求较低。
【作者单位】： 江西省神经病学研究所;南昌大学研究生院;
【基金】：江西省科技厅项目(20133BCB24017) 江西省科技厅基金资助项目(20123BBA13050)
【分类号】：R744.5
【正文快照】： 视神经脊髓炎(NMO)是主要累及视神经和脊髓的严重自身免疫性脱髓鞘性疾病。2004年Lennon等[1]首次在NMO患者血清中发现NMO-IgG抗体,即抗AQP4抗体[2],从而为认识NMO为有别于MS的独立性疾病提供了依据。目前已将血清抗AQP4抗体作为支持条件纳入NMO诊断标准[3]。血清抗AQP4抗体的

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 赵忙所;孔杰辰;石建雄;王丽华;谷伟中;耿同超;;视神经脊髓炎患者血清NMO-IgG检测及其诊断价值[J];中国神经免疫学和神经病学杂志;2011年01期

2 刘俊秀;赖蓉;钟德霞;黄帆;丰岩清;梁秀龄;;表达AQP4不同亚型的细胞系检测AQP4抗体敏感性的研究[J];中山大学学报(医学科学版);2012年05期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 覃惠洵;刘琳琳;郝洪军;刘凤君;高枫;;寡克隆区带及抗水通道蛋白4抗体在多发性硬化诊断中的意义[J];中国实用神经疾病杂志;2013年06期

2 李芳;;免疫抑制剂治疗神经脊髓炎的效果和安全性分析[J];中国实用神经疾病杂志;2015年11期

3 潘祥奋;;免疫抑制剂治疗视神经脊髓炎的有效性及安全性评价[J];中国医学工程;2013年06期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 蒙莲;水通道蛋白4抗体诊断视神经脊髓炎准确性的Meta分析[D];广西医科大学;2013年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 赵忙所;孙朝晖;耿同超;;稳定表达水通道蛋白-4 HEK293细胞株的建立及应用[J];细胞与分子免疫学杂志;2010年01期

2 孙巧松;刘俊秀;丰岩清;国宁;陈曦;赖蓉;黄帆;;中国人视神经脊髓炎疾病谱NMO-IgG/anti-AQP4抗体检测方法学的比较[J];中山大学学报(医学科学版);2010年06期

3 刘俊秀;孙巧松;丰岩清;曾缨;赖蓉;陈曦;黄帆;;稳定表达人水通道蛋白4的胚肾细胞系HEK293/AQP4的建立及应用[J];中山大学学报(医学科学版);2010年06期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 卢永科,李昱辰,杜伯雨,陈新志,仲来福;非蛋白巯基对顺铂在HEK293细胞内累积量的影响[J];卫生毒理学杂志;2004年03期

2 吕延成;潘晓瑜;周丹丹;袁俊杰;黄畅;;靶向UL27shRNA抑制Ⅱ型单纯疱疹病毒在HEK293细胞中的复制[J];中国生物化学与分子生物学报;2013年08期

3 杨保仲,庄心良,赵雪莲,李士通;肌肉型乙酰胆碱受体在HEK293细胞上的表达[J];中国药理学通报;2004年10期

4 张坦,徐琦,宋\，

本文编号：1269088