氯喹抑制自噬对海马神经元（HT22细胞）缺氧—复氧损伤的影响

发布时间：2017-12-20 22:05

  本文关键词：氯喹抑制自噬对海马神经元（HT22细胞）缺氧—复氧损伤的影响　出处：《南华大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的:本研究模拟脑缺血-再灌注损伤,复制海马神经元(HT22细胞)缺氧-复氧损伤模型以观察缺氧-复氧对海马神经元自噬的影响,探讨自噬变化在海马神经元缺氧-复氧损伤过程中的可能作用。方法:1.根据文献自制密闭缺氧装置,待HT22海马神经元融合度达80%后,放入缺氧装置内,通入95%N2+5%CO2混合气体造成细胞缺氧。实验分三组,以相应时间的正常培养为对照,分别观察缺氧1h、3h和6h对HT22细胞自噬和功能的影响。检测指标包括,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ比值的变化以及P62的表达水平,MTT比色法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒比色法检测HT22细胞的功能。2.缺氧1h后恢复氧供应以复制缺氧-复氧损伤模型。实验分三组:以相应时间的正常培养和缺氧培养为对照,Western blot观察复氧1h、3h、6h对HT22细胞自噬的影响。3.以缺氧1h复氧1h为缺氧-复氧损伤模型观察自噬抑制剂氯喹对海马神经元(HT22细胞)功能的影响。实验分为四组:⑴对照组⑵氯喹组⑶缺氧-复氧组⑷缺氧-复氧+氯喹组。检测指标包括,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ比值的变化以及P62的表达水平,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒比色法检测HT22细胞的功能。结果:1.HT22细胞缺氧1h、3h、6h时,各组自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ的比值表达均增高,P62蛋白的表达均减弱;细胞的存活率均下降,LDH释放量均增加;自噬程度以缺氧1h组最为突出。2.HT22细胞复氧1h、3h、6h时,与相应时间的正常培养和缺氧培养相比各组自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ的比值表达均增高,P62蛋白的表达均减弱,以复氧1h自噬程度最为突出。3.氯喹抑制HT22细胞缺氧-复氧诱导的自噬,自噬相关蛋白Beclin-1表达减弱、LC3Ⅱ/Ⅰ的比值以及P62蛋白的表达增高,细胞损伤减轻。结论:1.缺氧诱导HT22细胞自噬,引起细胞损伤。2.缺氧HT22细胞复氧后诱导自噬更加显著。3.氯喹抑制自噬可减轻缺氧-复氧后HT22细胞的损伤,提示减弱自噬可能具有保护缺血再灌注细胞的功效。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R743

【参考文献】

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本文编号：1313562