依达拉奉对SAH大鼠海马区JNK-自噬信号通路的影响

发布时间：2017-12-23 01:06

  本文关键词：依达拉奉对SAH大鼠海马区JNK-自噬信号通路的影响　出处：《华北理工大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的1探讨依达拉奉对蛛网膜下腔出血(Subarachnoid Hemorrhage,SAH)大鼠海马区神经细胞自噬的影响。2探讨依达拉奉对SAH大鼠海马区JNK-自噬信号通路的影响。方法将雄性清洁级健康SD大鼠192只(350~450g)采用随机方式等分配给假手术组(Sham组)、SAH模型组(SAH组)、SAH结合应用JNK抑制剂组(JNK组)、SAH联合应用依达拉奉干预组(Edaravone组)四个组。利用颅内动脉穿刺法制成大鼠SAH模型,Sham组只进行颅内动脉造模术但不穿破血管);SP600125组于造模前30min,利用立体定向仪行侧脑室注射SP600125溶液;Edaravone组在建模成功后予以依达拉奉干预治疗,采用5mg/kg剂量进行腹腔注射,12 h后重复给药一次,直至大鼠被处死。每大组又按6h、24h、72h、144 h时间点分为四个亚组。通过对4组大鼠前肢拉力进行比较;以及穿梭箱实验来测定每组大鼠各个时间点的被动逃避时间(Passive avoidance latency,PAL)以及主动回避反应率(Active avoidance reaction rate,AARR)从整体上评价各组大鼠行为学的改变情况。观测HE染色后每组大鼠海马区神经元形状及数量变化;应用免疫组织化学染色方法及Western-Blot法检测p-JNK蛋白以及自噬标志物Beclin-1和LC3-Ⅱ在大鼠海马区的表达情况。结果1抓力测定实验:与Sham组比较,SAH组在各时间点大鼠前肢拉力数值降低明显,差异具有统计学意义(P0.05),与SAH组比较,SP600125组在各时间点拉力值均提高;Edaravone组在各时间点拉力值有所升高,差异均有统计学意义(P0.05)。2穿梭箱实验:同Sham组比较,SAH组在各时间点AARR的结果均呈现下降的趋势,PAL明显增加;与SAH组比较,SP600125组大鼠逃避能力增强,躲避电击次数明显增多,AARR得以提升,PAL数值下降趋势明显,差异均有统计学意义(P0.05);Edaravone组各时间点AARR值提高明显,PAL时间缩短显著。3 HE染色结果:Sham组大鼠脑组织结构完整,海马区神经元细胞数目多,形态无改变。与Sham组相比,SAH组在各时间点海马区神经元排列紊乱、数量明显减少细胞多呈多边形,差异具有统计学意义(P0.05),与SAH组比较SP600125组接近正常形态细胞明显增多,差异具有统计学意义(P0.05),Edaravone组神经元坏死率明显下降、形态正常细胞数量开始增多,差异具有统计学意义(P0.05)。4 Beclin-1、LC3-Ⅱ免疫组化与免疫印迹结果:免疫组化:Beclin-1、LC3-Ⅱ在Sham组中海马区神经元胞浆中呈低表达且不随时间改变,SAH组阳性表达主要位于神经元细胞胞质。与Sham组比较,SAH组在各时间点表达显著上调,6h表达增加24h表达达高峰,72h、144h时间点随时间延长数目开始下降,差异具有统计学意义(P0.05)。与SAH组比较,SP600125组在各时间点显著降低,6h开始升高24h达高峰72h开始降低,差异有统计学意义(P0.05);在Edaravone组海马区神经元细胞胞质中表达水平明显降低,6h开始升高24h达到高峰72h开始降低,差异具有统计学意义(P0.05)。Western-Blot结果:Sham组中Beclin-1、LC3-Ⅱ表达量极低,且不随时间变化而改变。与Sham组比较,SAH组均呈现高表达水平,6h开始表达升高,在24h达高峰,72h开始逐渐降低,差异具有统计学意义(P0.05)。与SAH组比较,在SP600125组表达均降低,差异具有统计学意义(P0.05);Edaravone组各时间点表达水平同样出现下降趋势,差异具有统计学意义(P0.05)。5 p-JNK免疫组化与免疫印记结果:免疫组化结果:p-JNK阳性细胞主要存在于细胞核,仅少量表达于胞浆。Sham组中均呈较弱表达,SAH组表达量明显增加,6h表达增加,在24h达峰,72h开始逐渐降低(P0.05)。与SAH组比较,在SP600125组各时间点表达均降低(P0.05),6h开始升高,24h达峰,72h开始降低,差异具有统计学意义(P0.05);Edaravone组表达水平均有所下降(P0.05),6h升高24h达顶峰72h后逐步平稳减低,差异具有统计学意义(P0.05)。Western-Blot结果:Sham组基本无表达;SAH组表达量显著提高;与SAH组比较,SP600125组表达量下降趋势明显,差异具有统计学意义(P0.05);Edaravone组表达量也显著下降,差异具有统计学意义(P0.05)。结论1依达拉奉可抑制SAH后海马区神经细胞Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达,从而降低SAH后早期脑损伤程度。2依达拉奉可抑制SAH后海马区JNK信号过度激活,降低Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达,从而适当降低自噬激活的程度对SAH后海马区神经元细胞具有保护作用。
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R743.35
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本文编号：1321773