Nox家族和ROS在大鼠脑缺血再灌注损伤模型中的动态表达及特异性Nox-2和Nox-4抑制剂对其的干预研究

发布时间：2017-12-24 03:22

  本文关键词：Nox家族和ROS在大鼠脑缺血再灌注损伤模型中的动态表达及特异性Nox-2和Nox-4抑制剂对其的干预研究　出处：《苏州大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：第一部分Nox家族和ROS在大鼠脑缺血再灌注损伤模型中的动态表达情况目的:检测NOX家族(Nox1、Nox2、Nox3、Nox4、Nox5、Duox1和Duox2)以及ROS在短暂性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型大鼠半影区以及对侧相应区域的脑组织中经闭塞2h后再灌注,不同时间点的表达情况。方法:任选56只成年雄性SD大鼠,随机分为以下两个实验组:假手术组(Sham,1组)和MCAO组(7组)。利用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型。栓塞2 h后,去除鱼线,制备再灌注模型(MCAO/R),于再灌注0h、3h、6h、12h、24h以及48h时分别取出大鼠额颞底皮层脑组织做标本,半影区(Ischemic)以及对侧相应区域(Contralateral)的脑组织样本中NOX家族成员(Nox1、Nox2、Nox3、Nox4、Nox5、Duox1和Duox2)m RNA、蛋白表达情况分别采用半定量PCR法、Western Blot方法以及免疫荧光染色技术检测其表达水平的变化;同时采用荧光分光度计检测DCFH-DA荧光探针荧光强度法检测其脑组织中ROS在再灌注不同时间点的表达情况。结果:1、在MCAO模型大鼠经闭塞2h后再灌注后,其半影区(Ischemic)脑组织中Duox1、Nox2以及Nox4-m RNA的表达较对侧相应区域(Contralateral)中相应蛋白-m RNA的表达显著上调;而Duox2、Nox1以及Nox3-m RNA的表达在半影区(Ischemic)和对侧相应区域(Contralateral)的脑组织中均无明显改变。2、在MCAO模型大鼠经闭塞2h后再灌注后,其半影区(Ischemic)脑组织中Duox1、Nox2以及Nox4-蛋白的表达较对侧相应区域(Contralateral)中相应蛋白-蛋白的表达显著上调;而Duox2、Nox1以及Nox3-蛋白的表达在半影区(Ischemic)和对侧相应区域(Contralateral)的脑组织中均无明显改变。3、免疫荧光染色结果显示,MCAO模型大鼠经闭塞2h后再灌注3h时时,Nox2和Nox4在其半影区脑组织神经元中的表达较对侧相应区域脑组织神经元中的表达显著上调。4、免疫荧光染色结果显示,MCAO模型大鼠经闭塞2h后再灌注3h时时,Nox2和Nox4在其半影区脑组织星行胶质细胞中的表达较对侧相应区域脑组织星行胶质细胞中的表达亦显著上调。5、在MCAO模型大鼠经闭塞2h后再灌注后,其半影区(Ischemic)脑组织中ROS的表达水平较对侧相应区域(Contralateral)脑组织中ROS的表达水平显著上调。结论:1、MCAO模型大鼠经闭塞2h后再灌注时,Nox家族成员Duox2、Nox2以及Nox4在其半影区(Ischemic)脑组织中的表达较对侧相应区域(Contralateral)脑组织表达显著上调。2、MCAO模型大鼠经闭塞2h后再灌注3h时时,Nox2和Nox4在其半影区脑组织神经元和星行胶质细胞中的表达较对侧相应区域脑组织神经元和星行胶质细胞中的表达显著上调。3、MCAO模型大鼠经闭塞2h后再灌注时,其半影区(Ischemic)脑组织中ROS的表达水平较对侧相应区域(Contralateral)脑组织中ROS的表达水平显著上调。第二部分特异性Nox-2和Nox-4抑制剂对大鼠脑缺血再灌注损伤模型的干预研究目的:探索特异性Nox-2和Nox-4抑制剂对大鼠脑缺血再灌注损伤模型的干预作用。方法:任选32只成年雄性SD大鼠,随机分为以下四个实验组:假手术组(Sham,1组)和MCAO组(3组)。利用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,其中两组分别以特异性Nox-2抑制剂(gp91ds-tat)或特异性Nox-4抑制剂(GKT37831)预处理,同时以未经抑制剂处理的MCAO模型作为对照组。栓塞2 h后,去除鱼线,制备再灌注模型(MCAO/R),于再灌注24h时取出大鼠额颞底皮层脑组织做标本,其半影区(Ischemic)以及对侧相应区域(Contralateral)的脑组织样本,①ROS的表达情况:采用荧光分光度计检测DCFH-DA荧光探针荧光强度法检测;②脑组织损伤体积比例大小:采用体积比例法进行比较;③细胞凋亡情况:采用TUNEL免疫荧光染色法进行检测;④;⑤白蛋白(Albumin)蛋白表达水平:采用Western Blot方法进行检测。结果:在MCAO模型大鼠经闭塞2h后再灌注24h时,经Nox2抑制剂(gp91ds-tat)或Nox4抑制剂(GKT37831)处理的MCAO模型大鼠其半影区(Ischemic)脑组织中:1、ROS的表达水平较未经Nox2抑制剂(gp91ds-tat)或Nox4抑制剂(GKT37831)处理的MCAO模型大鼠其半影区(Ischemic)脑组织中ROS的表达显著下调;2、脑组织损伤体积比例较未经Nox2抑制剂(gp91ds-tat)或Nox4抑制剂(GKT37831)处理的MCAO模型大鼠其半影区(Ischemic)脑组织损伤体积比例显著降低;3、脑组织细胞凋亡比例较未经Nox2抑制剂(gp91ds-tat)或Nox4抑制剂(GKT37831)处理的MCAO模型大鼠其半影区(Ischemic)脑组织细胞凋亡比例显著降低;5、脑组织白蛋白(Albumin)蛋白表达水平较未经Nox2抑制剂(gp91ds-tat)或Nox4抑制剂(GKT37831)处理的MCAO模型大鼠其半影区(Ischemic)脑组织白蛋白(Albumin)蛋白表达水平显著降低。结论:Nox2抑制剂(gp91ds-tat)和Nox4抑制剂(GKT37831)可以显著抑制MCAO模型大鼠缺血再灌注时其半影区(Ischemic)脑组织中ROS的表达水平、脑组织损伤体积比例、脑组织细胞凋亡比例以及脑组织白蛋白(Albumin)蛋白的上调,进而起到脑保护作用。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.3

【参考文献】

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本文编号：1326668