载脂蛋白E对星形胶质细胞基质金属蛋白酶-9表达的作用及机制研究
本文关键词： 载脂蛋白E 星形胶质细胞 基质金属蛋白酶-9 基质金属蛋白酶组织抑制剂-1 血脑屏障 出处：《广西医科大学》2017年硕士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：目的探讨载脂蛋白E(ApoE)对星形胶质细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的作用及机制。方法体外培养C57BL/6J种属的ApoE基因敲除型(ApoE-/-)和野生型(WT)乳鼠的星形胶质细胞。用抗星形胶质纤维酸性蛋白(Anti astrocyte acidic protein,GFAP)抗体鉴定星形胶质细胞纯度,用抗MMP-9抗体检测星形胶质细胞以确定其定性表达MMP-9。将ApoE-/-和WT的星形胶质细胞分别分为对照组、活化组、抗体组(分为“活化组+抗TNF-α”、“活化组+抗IL-12”、“活化组+抗IL-6”和“活化组+抗IFN-γ),对照组不进行任何干预,活化组加百日咳毒素(PTX)、热灭活的结核分枝杆菌H37Ra刺激,在活化组的基础上设置抗体组,抗体组为4种不同处理,分别加入抗TNF-α、IL-12、IL-6、IFN-γ抗体,以抑制其相应的炎症因子。用ELISA方法检测对照组、活化组及抗体组的4个亚组中MMP-9、TIMP-1浓度,以确定活化组相对于对照组、抗体组的4个亚组相对于活化组的MMP-9和TIMP-1浓度变化情况;接着检测三组培养液中TNF-α、IL-12、IL-6、IFN-γ炎症因子的浓度,其中抗体组根据加入不同抗体的情况,只对抗体对应的炎症因子进行检测。结果ApoE-/-和WT的星形胶质细胞均定性表达MMP-9。ApoE-/-和WT的星形胶质细胞活化组相对于对应对照组MMP-9的浓度明显升高,差异有统计学意义(P0.05),抗体组中的4个亚组相对于活化组则明显降低,差异有统计学意义(P0.05);而TIMP-1的浓度分别在ApoE-/-和WT的星形胶质细胞各种情况之间没有明显差异,差异无统计学意义(P0.05);ApoE-/-和WT的星形胶质细胞的活化组相对于对照组炎症因子浓度明显升高,差异有统计学意义(P0.05),而加入抗体干预后的4个亚组,抗体组的4个亚组相对于活化组其对应的炎症因子浓度均明显降低,差异有统计学意义(P0.05),ApoE-/-乳鼠的活化组的炎症因子浓度均高于WT乳鼠,差异有统计学意义(P0.05)。结论ApoE可通过调节星形胶质细胞分泌炎症因子影响MMP-9的表达,从而影响血脑屏障的完整性。ApoE、炎症因子、MMP-9三者之间的关系可以作为中枢神经系统脱髓鞘性疾病防治的新的切入点。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of apolipoprotein (ApoE) on matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) in astrocytes. Methods in vitro culture of C57BL / 6J species of ApoE gene knockout type ApoE-r-) and wild type WTA). Astrocytes of neonatal rats. Anti astrocyte acidic protein was treated with anti-astrocyte fibrillary acidic protein (AFAP). GFAP antibody was used to identify the purity of astrocytes. The astrocytes of ApoE-r- and WT were divided into control group and activated group respectively by detecting astrocytes with anti MMP-9 antibody to determine the qualitative expression of MMP-9. The antibody group was divided into three groups: "activated group anti-TNF- 伪", "activated group anti-TNF- 伪", "activated group anti-TNF- 伪", "activated group anti-#en1#" and "activated group anti-IFN- 纬". The activated group was stimulated with pertussis toxin PTXX, and the heat-inactivated Mycobacterium tuberculosis H37Ra was stimulated. The antibody group was set up on the basis of the activated group. The antibody group was treated with four different treatments and anti-TNF- 伪 was added respectively. IL-12, IL-6 and IFN- 纬 antibodies were used to inhibit the corresponding inflammatory cytokines. MMP-9 was detected by ELISA in four subgroups of control group, activated group and antibody group. In order to determine the concentration of MMP-9 and TIMP-1 in the activated group and the four subgroups of the antibody group relative to the activated group, the concentration of MMP-9 and TIMP-1 in the activated group and the antibody group were determined. Then the concentration of TNF- 伪 IL-12 IL-6 IFN- 纬 inflammatory factor in the three groups was detected, and the antibody group was based on the addition of different antibodies. Results both ApoE-r- and WT astrocytes qualitatively expressed MMP-9.ApoE-r- and WT's astrocyte activation group compared with the control group. The concentration of MMP-9 in the control group was significantly increased. The difference was statistically significant (P 0.05), and the four subgroups in the antibody group were significantly lower than those in the activated group (P 0.05). However, there was no significant difference in the concentration of TIMP-1 between ApoE-r- and WT astrocytes, but the difference was not statistically significant (P 0.05). The concentration of inflammatory cytokines in ApoE-r- and WT activated astrocytes was significantly higher than that in control group (P 0.05). The concentration of inflammatory cytokines in the four subgroups of the antibody group was significantly lower than that in the activated group (P 0.05). The concentrations of inflammatory cytokines in activated group were higher than those in WT group. Conclusion ApoE can affect the expression of MMP-9 by regulating the secretion of inflammatory factors by astrocytes, thus affecting the integrity of blood-brain barrier. The relationship between MMP-9 and MMP-9 may be a new entry point for the prevention and treatment of demyelinating diseases in the central nervous system.
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R744.51
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，本文编号：1446397
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