BMSCs移植对缺血性脑卒中鼠IL-10、TGF-β1表达的影响

发布时间：2018-02-09 08:51

本文关键词： 骨髓间充质干细胞 MCAO 移植 IL-10 TGF-β1　出处：《南华大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的制备大鼠大脑中动脉缺血（Middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型，采用骨髓间充质干细胞（Bone marrow stromal cells，BMSCs）移植治疗缺血性脑卒中大鼠，观察大鼠神经功能评分，检测血清及脑组织中炎症因子IL-l0、TGF-β1的变化，探讨BMSCs移植对大鼠缺血再灌注脑损伤的修复作用及可能机制。方法选体重约100g左右雄性SD大鼠断颈处死后取其长骨的骨髓细胞，，经过全骨髓培养法培养BMSCs，取3-5代细胞用生理盐水稀释并定容制成2×106/ml细胞混悬液备用。利用改良线栓法制作SD大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型（MCAO）。将健康成年的36只雄性SD大鼠完全随机分为三组，A组为正常对照组（n=4），不给于任何处理；B组为模型对照组（n=16），造模成功后予以等剂量生理盐水注射；C组为细胞移植组（n=16），造模成功后予以BMSCs移植干预，缺血2h，再灌注24小时后，将2×106个MSCs通过尾静脉途径移植入MCAO大鼠体内。分别于移植后第1、3、7、14天不同时间点观察神经行为学评分，处死亚组并取标本，通过酶联免疫试剂盒及Western blot的方法检测大鼠血清及脑组织中炎症因子IL-l0、TGF-β1的变化情况。结果 1、成功培养了SD大鼠BMSCs：光学显微镜下，原代BMSCs贴壁数量较少，多数呈圆形或者类圆形，经过纯化、扩增后，贴壁细胞逐渐增多，呈长梭形，集落样生长，局部呈漩涡状；随着传代次数的增加，传至6～7代，细胞逐渐老化，生长逐渐缓慢，形态逐渐趋于一致，以扁平细胞为主，胞体饱满。免疫荧光法检测BMSCs表面特异性抗原:CD34(-)，CD54(+)。 2、神经行为学评分: A组0+0.00，各时间点第1天: B组3.50+0.27，C组3.21±0.57；3天: B组3.45+0.45，C组3.01±0.35；7天: B组3.21+0.25，C组2.72±0.34；14天: B组2.83+0.52，C组2.31±0.24。B、C各组评分明显高于A组（P0.01）。1天中B组和C组比较无明显统计学差异(P0.05)。3天、7天及14天中C组明显低于B组，差异有统计学意义(P0.05)。 3、MCAO大鼠血清IL-10的变化：A组10.11±0.55，各时间点第1天：B组35.23±1.27，C组55.51±2.51；3天：B组28.82±0.78，C组46.55±0.91；7天：B组25.18±0.53，C组37.12±1.38；14天：B组16.09±1.26，C组28.43±0.62。B、C各组血清IL-10水平明显高于A组（P0.01）。第1、3、7、14天组IL-10的表达逐渐下调，但C组血清IL-10水平明显高于B组（P0.01），差异有统计学意义。 4、MCAO大鼠血清TGF-β1的变化：A组16.00±0.81，各时间点第1天：B组69.21±1.25，C组88.38±0.67；3天：B组52.32±1.24，C组73.77±1.02；7天：B组42.71±0.54，C组54.62±1.72；14天： B组33.32±1.24，C组40.72±0.99。第1、3、7、14天中B、C组血清TGF-β1水平明显高于A组（P0.01）。C组血清TGF-β1水平明显高于B组（P0.01），差异有统计学意义。且随着1、3、7、14天时间的推移，B、C组血清TGF-β1的表达逐渐下调。 5、MCAO大鼠脑组织中IL-10、TGF-β1蛋白表达情况：A组低表达，B、C组各时间点均显著高于A组（P0.01）。随着1、3、7、14天的推移，B、C组两因子表达下调，但B组较C组更明显（P0.01），差异有统计学意义。结论 1、骨髓间充质干细胞移植对缺血性脑损伤有修复作用。 2、骨髓间充质干细胞修复神经损伤的机制可能与促进抗炎因子TGF-β1、 IL-10的分泌有关。
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【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R743.3

【参考文献】