胶质瘤中着丝粒蛋白W的表达及其意义

发布时间：2018-02-09 10:08

  本文关键词： 胶质瘤 着丝粒蛋白W CENP-W CUG2　出处：《南昌大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的： 脑胶质瘤是最为常见恶性脑肿瘤，它是一组能向胶质细胞分化特征功能的神经上皮细胞肿瘤总称，发病率占颅内肿瘤全部的50%-60%。近年来，尽管各种不同治疗方法综合应用，临床疗效有一定提高，但生存时间仍较短及生活质量不高，绝大多数患者最终都会出现肿瘤复发及转移。现有研究表明，基因中致癌过表达与抑癌失活紧密相关，而现如今对如何致癌的分子机制不明。 CENP-W于2007年首次被报道，其属于CCAN（constitutive centromereassociated network）家族，起初因发现在多种癌性组织及小鼠成纤维细胞具有高致瘤性故以一个假定的致癌基因并命名为CUG2（Cancer-upregulated gene2）；同时CENP-W在中枢神经系统发育中扮演重要角色并参与神经元的功能维持，敲除CENP-W可导致斑马鱼胚胎神经退行性变。国内外尚未深入探讨CENP-W在脑胶质瘤表达及与其生存预后之间的关系。 本研究拟初步探讨CENP-W在胶质瘤组织及细胞株中的表达与否、以及表达程度与病理级别（WHO分级）的关系，同时分析CENP-W的表达与胶质瘤患者生存时间预后关系，为下一步研究CENP-W在脑胶质瘤发生、发展过程可能所参与调节过程，为进一步在治疗脑胶质瘤方面提供一个新的方向。 方法：本实验设计分为三步 1.第一步通过Real-Time PCR、Western blotting、免疫组化检测对照组中正常脑组织（非瘤性脑组织）、实验组中4个不同病理级别脑胶质瘤的CENP-WmRNA与蛋白表达差异，收集数据并应用统计学方法进行分析。 2.第二步应用Western blotting检测方法检测A172、LN308、U118、U87、U251、LN229、SNB19、TJ899、TJ905九类胶质瘤细胞株中CENP-W与GAPDH蛋白表达对比情况，收集数据并应用统计学方法进行分析。 3.第三步所收集肿瘤标本的患者均行术后随访资料，将肿瘤患者各项相关因素收集后进行相关统计学分析，，并分析脑胶质瘤组织中CENP-W的表达与患者的预后生存之间的关系。 结果： 1、RT-PCR熔解曲线能分析到CENP-W和β-actin分别只有一个单峰，结果较好。mRNA表达水平：正常组织（1.0±0.19），I级（3.3±0.31），II级（5.4±0.43），III级（3.5±0.42），IV级（8.2±0.49）。CENP-W在不同病理级别的脑胶质瘤组织中与正常脑组织组对比，差异具有统计学意义。同时高级别的胶质瘤中CENP-W mRNA的表达水平明显高于I、II、III级胶质瘤。 2、CENP-W在脑胶质瘤组织中蛋白相对表达量结果：正常（0.46±0.062），I型（0.66±0.099），II型（0.85±0.069），III型（0.70±0.05），IV型（1.02±0.058），人脑胶质瘤组织中CENP-W蛋白相对表达量高，病理IV级的蛋白相对表达量是正常对照组2倍左右。 3、总蛋白主要从上述细胞株中提取，并与内参GAPDH对比，其中A172（0.89±0.11）、U87（0.71±0.08）、U251（0.71±0.07）、TJ899（0.83±0.09）、TJ905（1.08±0.11）5种胶质瘤细胞株较HEK293组（0.24±0.08）相对蛋白表达量明显增高，LN308（0.46±0.07）、LN229（0.39±0.09）则差异性较柔和，而U118（0.21±0.07）、SNB19（0.22±0.12）较HEK293相对表达量小；由上结果在大部分胶质瘤细胞株内CENP-W呈中-高表达。利用灰度软件进行扫描对比，P0.05差异具有统计学意义。 4、在人脑胶质瘤中CENP-W进一步用免疫组化方法进行验证。结果显示CENP-W在胶质瘤中表达阳性，细胞核呈阳性。而正常脑组织中表达阴性。利用卡方检验分析CENP-W与两组胶质瘤关系，P=0.0140.05，差异具有统计学意义。统计结果示在脑胶质瘤中CENP-W阳性率74.0%，其中阳性表达中高恶性组占81.4%，低恶性组占18.6%。 5、统计分析胶质瘤患者预后各项因素，从多因素分析上看，其中Grade、CENP-W的P值分别为0.00和0.005，故Grade、CENP-W对胶质瘤患者的生存时间存在相关性显著，余因素对生存预后影响不大。高恶性组较低恶性组的预后明显差。CENP-W表达是阴性的胶质瘤患者生存时间较长（HR=0.325，P=0.005），而CENP-W阳性患者的生存时间短。 结论： 1、CENP-W在脑胶质瘤中是上调致癌基因。 2、CENP-WmRNA、蛋白表达量有随着胶质瘤病理级别升高有渐增高趋势。 3、脑胶质瘤组织的免疫组化中CENP-W表达阳性对提示脑胶质瘤的恶性程度有一定的意义。
[Abstract]:Objective:
Glioma is the most common malignant brain tumor, it is a set of features to glial cell differentiation function of tumor neural epithelial cells in general, the incidence of intracranial tumors accounted for all of the 50%-60%. in recent years, in spite of the different treatment methods of comprehensive application, clinical curative effect is enhanced, but the survival time is shorter and the quality of life is not the high, most patients will eventually relapse and metastasis. The existing research indicates that gene expression and carcinogenesis suppressor inactivation is closely related to, and now on the molecular mechanism of how cancer is unknown.
CENP-W was first reported in 2007, which belongs to the CCAN (constitutive centromereassociated network) family, at first because it was found that fibroblasts are highly tumorigenic so a putative oncogenic gene named CUG2 in a variety of cancer tissues and mice (Cancer-upregulated Gene2); and CENP-W in the central nervous system play an important role in the development and involved in neuronal function maintenance, knockdown of CENP-W in zebrafish embryos can lead to neurodegeneration. At home and abroad has not yet in-depth study of CENP-W expression in glioma and its survival prognosis.
This study was designed to investigate the expression of CENP-W in glioma tissues and cell lines or not, and the degree of expression and pathological grade (WHO grade) relationship, and expression and prognosis of survival time of patients with glioma CENP-W analysis, the next step for the research of CENP-W in glioma occurrence, development process may be involved in the adjustment process, in order to further provide a new direction in the treatment of brain glioma.
Methods: the experimental design is divided into three steps
1., the first step was to detect the difference of CENP-WmRNA and protein expression between 4 normal brain tissues (non tumor brain tissues) in the control group and the 4 pathological grades of gliomas in the control group by Real-Time PCR, Western blotting and immunohistochemistry.
2., the second step is to detect A172, LN308, U118, U87, U251, LN229, SNB19, TJ899 and TJ905 in nine kinds of glioma cell lines by using Western blotting detection method, and collect data and analyze them by statistical methods.
3. the patients in the third step collected tumor specimens were followed up after operation, and the related factors of tumor patients were collected for statistical analysis. The relationship between the expression of CENP-W in glioma tissues and the prognosis and survival of patients was analyzed.
Result锛

本文编号：1497683