2,3-二羟基-6-硝基氨—磺酰苯喹喔啉（NBQX）对早产兔生发基质—脑室内出血后的神经保护性研究

发布时间：2018-03-01 02:29

本文关键词： 早产兔生发基质-脑室内出血动物模型 2 3-二羟基-6-硝基氨-磺酰苯喹喔啉髓鞘碱性蛋白微管相关蛋白-2　出处：《河北医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:生发基质-脑室内出血(germinal matrix-intraventricular hemorrhage,GM-IVH)是早产儿最常见的脑损伤形式之一,GM-IVH占新生儿颅内出血中80%以上。在极低出生体重儿中GM-IVH的发生率在20%~25%,当体重在500~750g的早产儿发生GM-IVH的比例会上升至45%左右。研究表明,孕周越小、体重越低,GM-IVH的发生率越高。随着我国围产医学的进步及新生儿重症监护技术的提高,早产儿、极早产儿、极低出生体重儿的出生率越来越高,伴随而来的是,早产儿GM-IVH的发生率上升。GM-IVH多发生在孕周小于34周的早产儿,GM-IVH幸存患儿在后期随访中发现存在不同程度神经功能障碍、脑瘫、认知障碍、行为缺陷等情况,严重影响早产儿的生存质量,给家庭、社会带来沉重的负担。因此,GM-IVH及其所致后遗症是仍然是有待解决的重要问题。早产儿中枢神经系统发育不成熟,脑损伤机制复杂,脑损伤的发病机制之一是大量兴奋性氨基酸分泌所致的兴奋毒作用,谷氨酸是常见的兴奋性氨基酸,发挥作用时必须与其受体结合,α-甲基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑基丙酸(AMPA)受体作为谷氨酸离子型受体之一,广泛分布在海马、大脑皮质、纹状体和小脑中的胶质细胞和神经元上。脑损伤后,激活AMPA受体,谷氨酸结合位于少突胶质细胞及神经元表面的AMPA受体,诱发钙超载,造成神经元细胞骨架蛋白降解、破坏,引起神经元损伤;作用于少突胶质细胞膜表面AMPA受体时,造成少突胶质细胞损伤、髓鞘形成障碍。2,3-二羟基-6-硝基氨-磺酰苯喹喔啉(NBQX)是AMPA受体的抑制剂,应用于GM-IVH患者,通过其抑制神经元及少突胶质细胞表面AMPA受体的表达,可否减轻神经元损害、保护少突胶质细胞,目前国内尚未研究报道。本研究通过已经建立的GM-IVH兔模型,探讨(1)GM-IVH后髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)表达,检测髓鞘损伤情况。(2)通过检测微管相关蛋白-2(microtubule associated protein-2,MAP-2)的表达,了解GM-IVH早产兔神经元损伤情况。(3)GM-IVH早产兔应用NBQX后,是否可以减轻GM-IVH后的脱髓鞘,以及发挥对神经元的保护作用。方法:1选取新西兰孕兔,孕29天(足月孕32天),进行剖宫产,迅速取出幼兔。生后迅速给予保温、奶粉喂养,于生后3小时,给予一部分早产兔50%丙三醇腹腔注射,剂量为10ml/Kg。其余不给予任何处理。2生后24小时接受头颅超声检查,观察GM-IVH的发生情况。3将发生GM-IVH的早产兔随机分为两组,NBQX治疗组(15只)和模型组(15只)。另取生后未给予任何处理的早产兔15只作为正常组。用剂量为10μL的NBQX对NBQX治疗组进行前囟注射,对照组给予同等容积的生理盐水。将NBQX治疗组、模型组、正常组的早产兔随机分为出生后3天、7天、14天三个亚组,按上述时间点给予处死,冰上剥离脑组织,一部分放入4%的多聚甲醛溶液中固定,供后期免疫组织化实验使用。另一部分放置于-80℃冰箱中,供蛋白印迹试验使用。4使用免疫组化的方法比较NBQX治疗组、模型组、正常组中早产兔脑室周围组织中微管相关蛋白-2(MAP-2)的表达情况。5使用蛋白印迹方法检测NBQX治疗组、模型组、正常组中早产兔脑室周围组织中髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达情况。6统计方法:采用SPSS19.0统计学软件、Microsoft Excel2003进行统计学处理,计量资料以均数±标准差表示,检验方差齐性,多个样本均数的比较采用LSD-t检验;若方差不齐采用秩和检验。检验水准定为0.05,P值0.05有统计学意义。结果:1成功复制了早产兔GM-IVH模型。对孕29天早产兔行剖宫产后获得早产兔,通过组织样本观察后证实成功制备了早产兔GM-IVH模型。2脑组织中MBP的表达。用蛋白印迹实验方法检测脑组织中MBP的表达。出生后3天、7天、14天,正常组早产兔脑组织中MBP的表达量逐渐增加,三个时间点两两比较,3天和7天比较差异无统计学意义;3天和14天、7天和14天比较,差异有统计学意义。在3天、7天、14天时,模型组中MBP的表达量均低于正常组的表达量,差异有统计学意义。在NBQX治疗组中,3天、7天、14天中MBP的表达量逐渐升高,3天与7天比较差异无统计学意义;3天与14天、7天与14天比较差异有统计学意义;在7天、14天时,NBQX治疗组与模型组比较,MBP的表达差异有统计学意义。3脑组织中MAP-2的表达。应用免疫组化检测脑组织中MAP-2的表达。MAP-2在正常组脑组织中排列整齐,成纤维状,且随着时间的延长,脑组织中MAP-2的表达增高,3天、7天、14天两两比较有统计学差异。模型组3天脑组织中MAP-2结构完整性较差,基本无染色,表达量降低;7天时脑组织中MAP-2的表达量稍有增高;14天时,脑组织中MAP-2排列相对完整,染色仍较淡,表达较前增强,模型组中任意两时间点比较,MAP-2的表达差异有统计学意义。且模型组中MAP-2的表达量较正常组低,差异有统计学意义。NBQX治疗组,3天、7天、14天表达量呈上升趋势,任意时间点两两比较脑组织中MAP-2的表达,差异有统计学意义;在7天、14天时,同一时间点高于模型组的表达量,低于正常组的表达量,差异有统计学意义。结论:1早产兔发生GM-IVH后,脑组织中MBP的表达降低,提示GM-IVH后影响少突胶质细胞的成熟及髓鞘化进程。给予NBQX治疗后,在一定程度上MBP的表达升高,提示NBQX干预有助于少突胶质细胞发育,改善预后。2早产兔发生GM-IVH后,脑组织中MAP-2的表达降低,提示GM-IVH后破坏神经元树突结构完整性。给予NBQX治疗后,在一定程度上MAP-2的表达升高,提示NBQX治疗后神经元树突结构相对完整,可能对神经元功能起到修复作用。
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【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R743.34

【参考文献】