格列本脲对胶质母细胞瘤增殖生长的影响及机制研究

发布时间：2018-03-04 11:15

  本文选题：格列本脲　切入点：胶质母细胞瘤　出处：《重庆医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的肿瘤是严重危害人类健康的四大疾病(心脏病、肿瘤、脑血管病、阿尔茨海默病)之一,由细胞异常分化、增殖形成,化疗作为治疗肿瘤的主要手段,常常引起众多副反应,如:免疫功能极其低下、骨髓功能受到抑制等,并且在化疗过程中,患者还出现对药物的耐药性,这更增加了医疗上治疗的难度。星形胶质瘤是肿瘤中常见类型,按照其病理学特点,世界卫生组织将其分为四个病理级别,其中胶质母细胞瘤是Ⅳ级,属于高恶性胶质瘤,侵袭性较强,发病率极高,且术后容易复发,致死率高,目前临床治疗效果不尽如意。因此,研究胶质瘤的发病机制并探寻新的治疗手段迫在眉睫。方法:本课题使用药物格列本脲作用胶质瘤细胞U251和U87,初步探索其对U251和U87的影响及机制研究。应用CCK8、划痕法、Transwell迁移与侵袭、Hocheset染色、流式细胞检测、p H探针、蛋白免疫印迹(Western Blot)等多种分子生物学和电生理学实验技术,检测格列本脲对胶质瘤U251和U87细胞增殖生长的影响及机制。体外培养人胶质瘤U251和U87细胞,随机分为实验组及对照组。利用不同浓度的格列本脲作用于体外培养的U251和U87细胞,共培养48 h,以未加入格列本脲的细胞组别为对照组,CCK8测定细胞的增殖能力。划痕法及Transwell观察细胞迁移和侵袭。Hocheset染色及流式细胞术检测细胞凋亡变化。p H探针观察细胞内酸碱度改变。Western Blot检测细胞中Kir4.1和MCT1的表达水平结果CCK8显示在一定浓度范围内,格列本脲可抑制细胞增殖(P0.05),并呈浓度依赖性(P0.05);划痕法显示格列本脲抑制细胞迁移(P0.05),Transwell法显示实验组迁移与侵袭细胞数量明显减少(P0.05),且随着药物浓度增高细胞数量逐渐减少(P0.05);Hochest法及流式检测显示实验组出现明显凋亡特征,且随着格列本脲浓度的升高,凋亡现象越明显(P0.05);荧光探针显示随着药物浓度的增加,荧光强度逐渐减弱(P0.05),提示药物浓度越高,胞内p H逐渐降低;Western Blot结果表明实验组细胞的Kir4.1和MCT1蛋白含量明显降低(P0.05),且随药物浓度的增高而下降(P0.05)。结论1格列本脲能够抑制胶质母细胞瘤增殖生长;2格列本脲通过影响Kir4.1和MCT1的表达,参与调节内环境酸碱度,发挥增殖抑制作用。
[Abstract]:Objective tumor is one of the four major diseases (heart disease, tumor, cerebrovascular disease, Alzheimer's disease) which is seriously harmful to human health. It often causes many side effects, such as the extremely low immune function, the suppression of bone marrow function, and the drug resistance of patients during chemotherapy. This adds to the difficulty of medical treatment. Astrocytoma is a common type of tumor. According to its pathological characteristics, the World Health Organization divides glioblastoma into four pathological grades, among which glioblastoma is grade 鈪，

本文编号：1565405