microRNA-200a在胶质瘤中的作用及部分机制的研究
本文选题：胶质瘤 切入点：TGF-β2 出处：《安徽医科大学》2017年硕士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：目的 研究microRNA-200a在不同恶性程度胶质瘤组织以及胶质瘤细胞系中的表达情况,其表达情况是否与胶质瘤的恶性生物学行为有关,并探讨其与TGF-β2的靶向关系。方法 采用Real-time PCR方法检测79例不同恶性程度人胶质瘤组织、15例正常脑组织(来自颅脑损伤术后患者)、人脑胶质瘤细胞系中miR-200a的表达情况。通过对胶质瘤细胞系(U251、A172)抑制或者过表达miR-200a后,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,MTT法检测细胞增殖活力,Transwell方法检测胶质瘤细胞的侵袭能力。用Targetscan软件预测,并用荧光素酶报告基因法验证miR-200a与TGF-β2 mRNA 3’UTR互补结合关系,对胶质瘤细胞系(U251、A172)抑制或者过表达miR-200a后通过western blot及q RT-PCR方法检测TGF-β2的变化情况。结果 qRT-PCR结果提示,相对于正常人脑组织,不同恶性程度的胶质瘤组织中miR-200a的表达明显下降,并且随着胶质瘤恶性程度的增高miR-200a的表达水平呈下降趋势,差异有统计学意义(P0.01),与正常脑组织相比,胶质瘤细胞系中miR-200a的表达亦明显下降,差异有统计学意义(P0.01)。通过瞬时转染miR-200a模拟物(mimic)及抑制剂后(inhibitor),miR-200a的水平分别得到了明显的提高和抑制,与阴性对照组相比,mimic组的增殖水平及侵袭能力受到抑制,而inhibitor组得到了显著提升(P0.05)。Targetscan软件预测,并采用荧光素酶报告基因证实了TGF-β2是miR-200a的靶基因。上述瞬时转染后,进一步研究提示TGF-β2的mRNA及蛋白水平出现明显的下调和上调(P0.01)。结论 miR-200a在胶质瘤中表达降低,并且与恶性程度呈负相关,提示其可能与胶质瘤的发生发展有密切联系。miR-200a能抑制人胶质瘤细胞的增殖及侵袭能力,其作用机制可能与其靶基因TGF-β2有关,可能为胶质瘤分子靶向治疗提供新思路。
[Abstract]:Objective to study the expression of microRNA-200a in glioma tissues and glioma cell lines with different degrees of malignancy, and whether the expression of microRNA-200a is related to the malignant biological behavior of gliomas. Methods Real-time PCR method was used to detect the expression of miR-200a in 79 cases of human glioma tissues with different degrees of malignancy and 15 cases of normal brain tissues (from postoperative patients with craniocerebral injury and human glioma cell lines). After inhibition or overexpression of miR-200a in glioma cell line U251 A172, Targetscan software was used to predict the invasion ability of glioma cells, and luciferase reporter gene method was used to verify the complementary binding relationship between miR-200a and TGF- 尾 2 mRNA 3UTR. The expression of TGF- 尾 2 was detected by western blot and qRT-PCR methods. The results of qRT-PCR showed that the expression of miR-200a in glioma tissues with different malignant degrees was significantly lower than that in normal human brain tissues. The expression of miR-200a decreased with the increase of malignant degree of glioma, and the difference was statistically significant (P 0.01). Compared with the normal brain tissue, the expression of miR-200a in glioma cell line also decreased significantly. The level of miR-200a mimicoid was significantly increased and inhibited by transient transfection of miR-200a mimicoid and inhibitor, and the proliferation and invasion ability of mimic group were inhibited as compared with the negative control group. However, the inhibitor group was predicted by P0.05N. Targetscan software, and the luciferase reporter gene was used to confirm that TGF- 尾 2 was the target gene of miR-200a. Further studies indicated that the mRNA and protein levels of TGF- 尾 2 were down-regulated and up-regulated (P 0.01). Conclusion the expression of miR-200a in gliomas is decreased and negatively correlated with the degree of malignancy. The results suggest that it may be closely related to the occurrence and development of glioma. MiR-200a can inhibit the proliferation and invasion of human glioma cells, and its mechanism may be related to its target gene TGF- 尾 2, which may provide a new idea for the molecular targeting therapy of glioma.
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R739.41
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，本文编号：1611068
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