PI3K抑制剂BEZ235在MGMT阳性的胶质瘤细胞治疗的研究

发布时间：2018-03-18 09:20

  本文选题：胶质瘤　切入点：细胞增殖　出处：《苏州大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：神经胶质瘤是具有高度恶性，高侵袭性的原发脑肿瘤。多形性胶质母细胞瘤（GBM）是最常见、最致命的。目前主流的治疗方法是多种方法结合处理，一些适当的辅助治疗会延长患者的生存预期。 目前的神经胶质瘤治疗包括在安全情况下最大限度的切除肿瘤，联合术后放疗及口服DNA烷化剂。替莫唑胺（TMZ）的疗效根据GBM的组织来源及甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）启动子的甲基化的情况有所不同。NVP-BEZ235被证明在体内和体外是通过抑制自噬和增加细胞凋亡提高TMZ对恶性胶质瘤的疗效。PI3K参与NF-κB-MGMT调节。也有将PI3K抑制剂与TMZ联合治疗以提高疗效的研究。PI3K抑制剂能够抑制肿瘤生长。因为现阶段PI3K抑制的研究，BEZ235作为一个具有潜在抗肿瘤的药物已经作为第一批PI3K抑制剂作为临床试验中。本研究主要目的在于测试在耐化疗的MGMT阳性的胶质瘤细胞系中TMZ和BEZ235联合治疗是否比单独BEZ及TMZ治疗抗肿瘤活性更加有效。 本课题从三个方面对PI3K抑制剂BEZ235在MGMT阳性的胶质瘤细胞治疗的研究：1.PI3K/Akt/mTOR抑制剂之一NVP-BEZ235对肿瘤细胞增殖的影响。2. BEZ235对相关肿瘤细胞甲基化和非甲基化程度的影响。3.比较细胞系各处理组中MGMT蛋白表达情况。 目的： 探讨MGMT阳性肿瘤细胞系与MGMT阴性细胞肿瘤细胞系之间TMZ治疗效果差距，同时通过对PI3K/mTOR抑制剂的NVP-BEZ235联合常规胶质瘤化疗药物TMZ联合运用，研究不同情况下联合处理后是否能提高对耐TMZ的MGMT阳性胶质瘤细胞株的治疗效果。 方法： 实验选取MGMT阳性胶质瘤细胞系T98G及MGMT阴性细胞系A172，将对数期的细胞接种于6孔板、96孔板中，实验分为对照组和实验组，在A172肿瘤细胞系内，使用TMZ处理组及不使用药物组。T98G细胞系内，对照组不使用任何药物，处理组又分为单独使用抗肿瘤药物TMZ组，单独使用PI3K/Akt抑制剂BEZ235组，TMZ联合PI3K/Akt抑制剂BEZ235组。1.在24,48,72小时处理时间中使用MTT法分析肿瘤细胞系个实验组增殖抑制率，了解各组处理后细胞增殖抑制率的效果及程度。2.使用Methylation PCR比较T98G、A172各自单独使用TMZ处理组，，及T98G中TMZ联合BEZ235处理组各组的MGMT基因的甲基化及非甲基化程度。3.量化处理，使用Western Blot实验方法检测上部分中各组的MGMT Protein表达及分析统计学意义。 结果： 1.TMZ在MGMT阳性细胞系T98G中效果明显较A172细胞系差，在TMZ联合使用不同浓度的BEZ235处理中，效果均较单独TMZ使用效果好。2. Methylation PCR量化处理结果提示T98G组中TMZ联合BEZ235处理效果较单独使用TMZ的A172和T98G的抑制率存在统计学意义。3.量化免疫印迹（Western Blot）实验结果后，各实验组MGMT蛋白含量的表达也符合甲基化PCR的结果，提示了BEZ235处理后明显的减少了T98G细胞中MGMT的去甲基化程度。 结论： 1.MGMT阳性细胞系中单独使用TMZ效果不佳，联合使用BEZ235后，效果较单独使用增强，其增强效果存在时间及浓度依赖特点；单独使用BEZ235也对T98G细胞存在细胞杀伤性。 2.在T98G细胞系中，BEZ235联合TMZ处理显示更强细胞毒性，提示BEZ235可通过NF-κB-MGMT通路及抑制肿瘤活性。 3.通过甲基化PCR分析MGMT启动子的甲基化状态，作为PI3K抑制剂(PI3Ki)起作用的BEZ235能显著逆转MGMT启动子的非甲基化，进而减少MGMT蛋白表达。
[Abstract]:Glioma is a highly aggressive and highly aggressive primary brain tumor. Glioblastoma multiforme (GBM) is the most common and the most lethal. Currently, the mainstream treatment is multiple ways of combining treatment, and some appropriate adjuvant therapy will prolong the survival expectation of patients.
Glioma treatment currently included in the safety case maximum resection combined with postoperative radiotherapy and DNA. Oral alkylating agent temozolomide (TMZ) curative effect according to the tissue source and GBM methylguanine -DNA methyltransferase (MGMT) promoter methylation of.NVP-BEZ235 was demonstrated in different in vitro and in vivo by inhibiting autophagy and increase the apoptosis of.PI3K to improve the curative effect of TMZ on malignant glioma in NF- kappa B-MGMT regulation. There will be PI3K inhibitors and TMZ combination therapy to improve the therapeutic effect of.PI3K inhibitor can inhibit the growth of tumor. Because the present research of PI3K inhibition, BEZ235 as a potential anti tumor the drug has been as the first batch of PI3K inhibitors in the clinical trials. The main purpose of this study is to test the resistance to chemotherapy of MGMT positive glioma cell lines TMZ and BEZ235 combined treatment Whether treatment is more effective than the antitumor activity of BEZ and TMZ alone.
This paper from the three aspects of the research of PI3K inhibitor BEZ235 in MGMT positive glioma cell therapy: effect of BEZ235 on the expression of MGMT.2. correlated with tumor cell methylation and non methylation of the.3. cells in the treatment group of NVP-BEZ235 protein 1.PI3K/Akt/mTOR inhibitor effect on tumor cell proliferation.
Objective:
Between MGMT positive tumor cells and MGMT negative cell tumor cell line TMZ treatment gap, at the same time through the PI3K/mTOR inhibitor NVP-BEZ235 combined with conventional chemotherapy combined with TMZ glioma, whether to improve MGMT positive glioma cell line TMZ resistant to treatment effect to study under different conditions after the combined treatment.
Method锛

本文编号：1628975