右美托咪啶对电点燃癫痫大鼠海马组织中SOD、MDA含量及iNOS表达的影响

发布时间：2018-03-25 14:04

  本文选题：癫痫　切入点：右美托咪啶　出处：《河北医科大学》2014年硕士论文

【摘要】：目的：癫痫(epilepsy)是神经科最常见慢性疾病之一，既有原发性的，也有继发性的，临床上以脑部疾病后癫痫常见。癫痫在幼年时期即有较高的的发病率，世界上近1%的人口遭受着癫痫这一慢性疾病的困扰，在目前的医疗水平下仍有近30%的癫痫患者经过药物治疗后不能得到理想的控制。癫痫的病理基础为脑部神经元的异常放电。目前对于癫痫的脑损伤机制有以下几方面：细胞内钙超载、氧化应激、兴奋性氨基酸中毒、炎症反应及凋亡等多个方面，并且它们之间相互影响，互为因果，影响脑部神经元的功能。因此抗癫痫药物的选用及研发也成为近年来研究的热点，同时针对抗氧化应激成为众多抗癫痫药物研究的重要的一方面。 本研究以雄性Wistar大鼠为实验动物，应用杏仁基底外侧核电点燃法建立大鼠慢性癫痫模型。依据Racine分级，记录观察大鼠癫痫发作的严重程度，并用右美托咪啶进行腹腔注射加以干预，通过Morris水迷宫检测癫痫大鼠及右美托咪啶干预大鼠学习记忆能力的改变，检测海马组织中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量高低情况及运用WesternBlot方法检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白表达变化。观察右美托咪啶是否通过抗氧化作用对癫痫大鼠认知有改善作用，并且同时对右美托咪啶的抗癫痫作用机制进行研究。 方法：清洁级健康成年雄性Wistar大鼠有43只，随机分组：正常对照组（NC组）8只，未给予植入电极，每天抓取一次。假手术组（SH组）8只，给予杏仁基底外侧核植入电极，未行电刺激；慢性电点燃癫痫组（EP组）9只，慢性电点燃程序刺激予以点燃后刺激；右美托咪啶低剂量组（LD组）9只，慢性电点燃程序刺激+点燃后刺激+腹腔注射右美托咪啶（50μg/kg）；右美托咪啶高剂量组（HD组）9只，慢性电点燃程序刺激+点燃后刺激+右美托咪啶（100μg/kg）腹腔注射。EP组、HD组、LD组测定后放电阈值后将符合点燃成功后大鼠予以慢性电点燃刺激，点燃成功后予以每日一次点燃后刺激，其中LD组/HD组于点燃后每日电刺激前5分钟给予右美托咪啶50μg/kg/100μg/kg腹腔内注射，一周后将各组大鼠行Morris水迷宫试验，检测各组大鼠空间学习记忆能力，记录其逃避潜伏期，实验结束后将五组大鼠断头处死，取海马组织，运用Western Blot检测海马脑组织中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白表达及制备10%海马脑组织匀浆并采用比色法检测海马组织中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的含量变化。 结果： 1给予慢性电点燃程序刺激后， EP组达到点燃的大鼠8只，HD、LD组达到点燃的大鼠8只，点燃成功后继续给予杏仁基底外侧核电刺激，HD组给予右美托咪定后癫痫发作等级较EP组明显降低，LD组发作等级较EP组无明显变化。SH组和NC组均无癫痫发作。 2Morris水迷宫检测结果，对各组大鼠航行结果统计均值，记录平均逃避潜伏期，各组之间进行比较发现：定位航行第一天：EP、LD、HD组逃避潜伏期均较NC组延长，但统计学无明显差异， NC组和SH组无统计学差异（P0.05）。第二天与第一天相比，各组逃避潜伏期均值均明显缩短，但EP、LD、HD组均较NC组延长，有统计学意义（P0.05），，NC组和SH组无统计学差异（P0.05），LD、HD组均较EP组缩短， HD组与EP组有统计学意义（P0.05），LD组与EP组无统计学差异。第三天测试结果与第二天相比各组逃避潜伏期均值均明显缩短，EP、LD、HD组均较NC组延长，有统计学意义（P0.05），NC组和SH组无统计学差异（P0.05），LD、HD组均较EP组缩短，HD组与EP组有统计学意义（P0.05），LD组与EP组无统计学差异。第四天各组逃避潜伏期均较第三天缩短。各组比较结果同第三天。 3大鼠海马脑组织匀浆MDA含量变化EP组(5.002±1.515nmol/mgprot)、LD组(4.757±0.939nmol/mgprot)MDA含量明显升高，与NC组(2.078±0.593nmol/mgprot)比较，差异有统计学意义(P0.05)； HD组(2.3180±0.756nmol/mgprot)与NC组相比较无统计学差异（P0.05）；NC组、SH组(2.101±0.575nmol/mgprot)中MDA含量相比较，差异无统计学意义（P0.05）; HD组MDA含量与EP组比较减少，差异有统计学意义(P0.05)。 4大鼠海马脑组织匀浆SOD活力变EP组(19.2012±4.33U/mgprot)、LD组(20.71±3.88U/mgprot)SOD活力明显减弱，与NC组(33.16±6.13U/mgprot)比较，差异有统计学意义(P0.05)；HD组(27.27±6.99U/mgprot)与NC组相比较无统计学差异（P0.05）；NC组、SH组(33.15±3.58U/mgprot)中SOD活力相比较，差异无统计学意义（P0.05）; HD组SOD活力增强，与EP组比较差异有统计学意义(P0.05)。 5大鼠海马Western blot结果EP组（0.658±0.215）、 LD组（0.644±0.220）海马脑组织中一氧化氮合酶（iNOS）蛋白表达较NC组（0.381±0.163）、SH组（0.385±0.156）明显升高，差异有统计学意义(P0.05)； NC组、SH组海马脑组织中一氧化氮合酶（iNOS）蛋白表达无统计学差异（P0.05）；HD组（0.419±0.134）海马脑组织中一氧化氮合酶（iNOS）蛋白表达较EP组明显降低，差异具有统计学意义(P0.05)。 结论： 1成功建立杏仁基底外侧核电点燃慢性癫痫模型，癫痫大鼠的学习记忆能力下降，右美托咪啶可能会改善电点燃癫痫大鼠的学习记忆功能。 2右美托咪啶通过降低癫痫大鼠海马脑组织中一氧化氮合酶（iNOS）蛋白表达，增强SOD活力，降低MDA含量，验证了其抗氧化应激作用，进而证实其潜在抗癫痫作用及对脑组织神经元的保护作用，具体在临床的应用有待进一步研究。
[Abstract]:Objective: epilepsy (epilepsy) is one of the most common chronic disease in neurology, both primary, or secondary, common in clinical brain disease after epilepsy. Epilepsy in infancy is a high incidence, nearly 1% of the world's population suffers from a chronic illness of epilepsy in the current medical level, there are still nearly 30% of epilepsy patients after drug treatment can not get ideal control. The pathological basis of epilepsy of brain neurons abnormal discharge. There are the following aspects for the mechanism of brain injury epilepsy: intracellular calcium overload, oxidative stress, excitatory amino acid toxicity, many aspects of inflammation the reaction and apoptosis, and the mutual influence between them, affect the brain function of reciprocal causation, so the selection and development of anti epilepsy drugs has become a research hotspot in recent years, at the same time for the anti oxidative stress become One of the most important aspects of the study of antiepileptic drugs.
In this study, male Wistar rats as the experimental animal, application of basolateral amygdala kindling method to establish a rat model of chronic epilepsy. According to Racine classification, observed the severity of epileptic rats, and intraperitoneal injection of dexmedetomidine intervention, through the Morris water maze test in epileptic rats and dexmedetomidine in rats the changes of learning and memory, hippocampus tissue superoxide dismutase (SOD), malondialdehyde (MDA) content and iNOS was detected by using the method of WesternBlot (iNOS) protein expression changes. To observe the effects of dexmedetomidine by antioxidation on cognitive epileptic rats had improved, and at the same time of dexmedetomidine antiepileptic mechanism were studied.
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本文编号：1663447