杏仁核点燃大鼠癫痫持续状态后海马miRNA表达谱与神经元凋亡的相关性研究

发布时间：2018-03-29 01:36

  本文选题：癫痫持续状态　切入点：miRNA　出处：《泰山医学院》2014年硕士论文

【摘要】：目的 癫痫是中枢神经系统常见病，目前影响着全球0.5%~1%的人群。选择性神经元死亡和苔藓纤维芽生等病理生理过程与癫痫的发生及发展有关。microRNA(miRNA)是一类内源性的具有调控功能的非编码小RNA，它通过诱导沉默复合体形成来降解靶mRNA，或者阻遏靶mRNA的翻译。最近越来越多的文献报道，miRNA在中枢神经系统疾病的发生发展中发挥着极为重要的作用。本实验通过建立杏仁核点燃癫痫持续状态模型的动物实验来探讨海马miRNA表达谱的变化，并且对癫痫持续状态后差异表达的miRNA与海马神经元凋亡的关系进行了评估。 研究方法 1、首先选用6~8周龄健康雄性SD大鼠，建立杏仁核点燃大鼠癫痫持续状态模型，于造模成功后24小时提取大鼠脑组织海马区miRNA，采用高通量测序技术研究癫痫持续状态后大鼠海马区脑组织与正常大鼠海马区脑组织中miRNA表达谱的差异。 2、随后将筛选出的差异表达明显的6个miRNA用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction, qRT-PCR)进行验证。 3、应用靶基因预测软件（RNAhybrid和miRand）对以上6个miRNA的目的候选靶mRNA进行了预测，并使用KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）进行通路分析。 4、最后检测此6个miRNA在癫痫持续状态后不同时间点（4小时，24小时，1周和3周）的动态变化，与此同时应用Nissel染色和TUNEL（Terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP end-labeling assay）染色检测癫痫持续状态后不同时间点海马神经元生存和凋亡情况，进一步评估筛选出的miRNA是否与癫痫持续状态后神经元凋亡有关。 结果 1、杏仁核点燃癫痫持续状态大鼠和对照组正常大鼠海马组织差异表达的miRNA：在癫痫持续状态后24小时检测出差异表达的miRNA共37个，其中上调的miRNA有34个，，下调的有3个。进一步筛选出在癫痫持续状态后变化大于2倍的（P＜0.01且P≠0）6个miRNA (miR-874-3p, miR-20a-5p, miR-345-3p, miR-365-5p, miR-764-3p andmiR-99b-3p)，在以上6个筛选出的miRNA中，上调的miRNA表达差异最大的是miR-879-5p （4.177倍），差异最小的是miR-764-3p （2.078倍），下调大于2倍的是miR-99b-3p。 2、采用qRT-PCR对结果进行验证：将筛选出的变化明显的6个miRNA进行qRT-PCR验证，miR-874-3p, miR-20a-5p, miR-345-3p, miR-365-5p, miR-764-3p的表达量与正常对照组相比明显增高，而miR-99b-3p的表达量明显下降，此与高通量测序结果一致。 3、靶基因预测：利用RNAhybrid和miRand两个靶基因预测软件对筛选出的6个miRNA的靶mRNA进行预测，KEGG通路分析进一步显示此6个miRNA的靶基因在癫痫持续状态后凋亡通路中发挥十分重要的作用。 4、miRNA的动态变化和Nissel染色及TUNEL染色的病理结果：以上miRNA在癫痫持续状态后1周表达量的变化最明显，Nissel染色及TUNEL染色结果显示在癫痫持续状态后海马区脑组织生存神经元减少，凋亡神经元增多，且在癫痫持续状态后1周时最明显，这与筛选出的miRNA的动态变化相一致。进一步分析miRNA和癫痫持续状态后凋亡的关系显示miR-365-5p和miR-99b-3p的差异表达水平与癫痫持续状态后神经元凋亡具有明显相关性。 结论 大鼠癫痫持续状态后，海马区脑组织中miRNA的表达量发生明显变化，并且差异表达的miRNA是癫痫持续状态后神经元凋亡重要的调节因子。
[Abstract]:objective
Epilepsy is a common disease of the central nervous system, currently affecting the global 0.5%~1% population. Selective neuronal death and mossy fiber sprouting in the pathophysiological processes of epilepsy and the occurrence and development of.MicroRNA (miRNA) is a kind of endogenous with regulationfunction encoding non small RNA, it can induce silencing complex formation to degradation of target mRNA. Or repression of target mRNA translation. More recent reports in the literature, miRNA in the central nervous system disease development plays an extremely important role. By establishing the animal experiment of amygdala kindling epileptic state model to explore the expression of hippocampal miRNA, and assess the relationship of miRNA expression of epilepsy after status epilepticus and apoptosis of hippocampus neurons.
research method
1, the first 6~8 weeks old healthy male SD rats to establish rat amygdala kindling model of status epilepticus, 24 hours after the success in modeling the extraction of brain tissue in rats hippocampus miRNA, using high-throughput sequencing technology to study epilepsy expression profiling of miRNA in hippocampus of rats with brain tissue and brain tissue in the hippocampus of normal rats.
2, then the 6 differentially expressed miRNA were identified by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction (Real-time Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction, qRT-PCR).
3, we applied the target gene prediction software (RNAhybrid and miRand) to predict the above 6 miRNA target candidate mRNA, and used KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes) to conduct path analysis.
4, finally detect the 6 miRNA at different time points after status epilepticus (4 hours, 24 hours, 1 weeks and 3 weeks) the dynamic changes at the same time, using Nissel staining and TUNEL (Terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP end-labeling assay) were detected at different time points after status epilepticus in hippocampal neuron survival and apoptosis, further evaluation whether the selected miRNA and status epilepticus induced neuronal apoptosis.
Result
1, status epilepticus rats and expression of hippocampus of rats in the control group of normal miRNA in amygdala kindled epileptic state after 24 hours to detect the expression of miRNA in a total of 37, which increased 34 in miRNA, down 3. Further screened in status epilepticus after changes greater than 2 times (P < 0.01 and P = 0) and 6 miRNA (miR-874-3p, miR-20a-5p, miR-345-3p, miR-365-5p, miR-764-3p, andmiR-99b-3p) in more than 6 screened miRNA, upregulation of miRNA expression of miR-879-5p was the highest (4.177 times), the difference is the smallest miR-764-3p (2.078 times), down more than 2 times is miR-99b-3p.
2, using qRT-PCR to verify the results: 6 the change of miRNA screened obvious qRT-PCR validation, miR-874-3p, miR-20a-5p, miR-345-3p, miR-365-5p, miR-764-3p expression was significantly increased compared with normal control group, while the expression of miR-99b-3p was obviously decreased, the sequencing results were consistent with the high throughput.
3, target gene prediction: we use RNAhybrid and miRand two target gene prediction software to predict the target miRNA of 6 miRNA targets. KEGG pathway analysis further shows that these 6 miRNA target genes play a very important role in the apoptotic pathway after status epilepticus.
4, the pathological results of the dynamic changes of miRNA and Nissel staining and TUNEL staining: more than miRNA in status epilepticus after 1 weeks, the expression of the most obvious, Nissel staining and TUNEL staining showed reduced survival of neurons in hippocampus in epileptic state, the apoptosis of neurons increased, and in 1 weeks after epilepsy continue to state the most obvious, consistent with the dynamic changes of the screened miRNA. Further analysis of miRNA and apoptosis after status epilepticus relationship differences between miR-365-5p and miR-99b-3p expression and neuronal apoptosis after status epilepticus has obvious relevance.
conclusion
After the status epilepticus in rats, the expression level of miRNA in hippocampal area changed significantly, and the differential expression of miRNA was an important regulator of neuronal apoptosis after status epilepticus.

【学位授予单位】：泰山医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R742.1

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 胡剑平,白栓成,秦广平;咪唑安定治疗癫痫持续状态的体会[J];内蒙古医学杂志;2004年09期

2 朱玉民;癫痫持续状态诊治分析[J];医药论坛杂志;2004年20期

3 王治静,陈小聪,李华;咪达唑仑治疗小儿癫痫持续状态30例疗效观察[J];陕西医学杂志;2005年01期

4 缪长青,朱耀平;麻醉方法抢救癫痫持续状态[J];海南医学;2005年02期

5 马艳;安定治疗癫痫持续状态46例临床分析[J];重庆医学;2005年03期

6 张敏;癫痫持续状态的治疗及护理[J];湖北中医杂志;2005年03期

7 吴江虹;陈军华;徐建华;;癫痫持续状态致多脏器功能衰竭的临床研究[J];井冈山学院学报(自然科学版);2006年03期

8 柏雪;;儿童癫痫持续状态的治疗体会[J];医药产业资讯;2006年03期

9 Manno E.M;Pfeifer E.A;Cascino G.D;邱伟庆;;癫痫持续状态患者的心脏病理[J];世界核心医学期刊文摘(神经病学分册);2006年05期

10 齐爱华;;癫痫持续状态45例分析[J];中国误诊学杂志;2006年15期

相关会议论文 前10条

1 宋安军;伍国锋;;癫痫持续状态处理研究[A];贵州省医学会第八届神经病学年会论文集[C];2010年

2 韩蕴丽;李杏;;50例癫痫持续状态的临床特点与影响近期疗效的相关因素分析[A];中华医学会第十五次全国儿科学术大会论文汇编（上册）[C];2010年

3 张郑平;;首发症状为癫痫持续状态的就诊患者临床分析(附35份病例)[A];贵州省医学会第八届神经病学年会论文集[C];2010年

4 刘俊秀;康玉振;;小儿癫痫持续状态的抢救[A];中华医学会全国第五次急诊医学学术会议论文集[C];1994年

5 孙云菊;;癫痫持续状态治疗体会(附12例分析)[A];中华医学会全国第五次急诊医学学术会议论文集[C];1994年

6 扬满庚;;东莨菪碱治疗癫痫持续状态4例报告[A];第七次全国莨菪类药研究学术交流会论文汇编[C];2001年

7 魏忠东;;东莨菪碱控制癫痫持续状态临床观察[A];第七次全国莨菪类药研究学术交流会论文汇编[C];2001年

8 朱淑萍;张琴;付晓荣;;安定持续泵入治疗儿童癫痫持续状态的护理[A];全国儿科护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2002年

9 王远芳;;癫痫持续状态的护理[A];中国心理卫生协会第四届学术大会论文汇编[C];2003年

10 罗蓉;汤有才;毛萌;肖侠明;;咪唑安定治疗儿童癫痫持续状态的疗效观察[A];第五次全国中西医结合神经科学术会议论文集[C];2004年

相关重要报纸文章 前9条

1 ;癫痫持续状态的分类及诊断[N];农村医药报（汉）;2008年

2 李军;癫痫持续状态的治疗[N];农村医药报（汉）;2008年

3 本报记者 魏平;控制癫痫持续——药效求快 剂量要足[N];医药经济报;2011年

4 ;癫痫发作病例分析（二）[N];农村医药报（汉）;2007年

5 首都医科大学附属北京天坛医院小儿科 梁承玮;警惕小儿持续非惊厥性癫痫[N];健康报;2009年

6 姚南;癫痫规律护理防复发[N];医药养生保健报;2006年

7 王锦蓉;哪些药物停服会出现“反弹”现象[N];上海中医药报;2009年

8 肖岚;癫痫发作时的护理[N];大众卫生报;2002年

9 夏虫;癫痫发作，何时该叫救护车[N];医药经济报;2004年

相关博士学位论文 前8条

1 王艺;癫痫持续状态亚低温神经保护作用机制的研究[D];复旦大学;2009年

2 李真;HMGB1在幼年大鼠癫痫持续状态中的作用研究[D];山东大学;2013年

3 史志勤;实验性癫痫大鼠凋亡机制的探讨及重组人促红细胞生成素的影响[D];河北医科大学;2009年

4 张忱;大鼠癫痫持续状态后海马miRNA表达谱的研究[D];中南大学;2010年

5 解媛媛;miR-34a在癫痫持续状态后大鼠海马神经元凋亡发生中的作用[D];中南大学;2012年

6 周渊峰;亚低温对癫痫持续状态脑损伤神经保护机制的实验研究[D];复旦大学;2010年

7 姚红;2R，4R-APDC对大鼠癫痫持续状态后结构和功能可塑性变化的影响[D];山东大学;2008年

8 王树华;癫痫持续状态大鼠海马神经元程序性死亡与μ-calpain相关机制的实验研究[D];山东大学;2008年

相关硕士学位论文 前10条

1 张凌锋;咪达唑仑治疗癫痫持续状态疗效的系统评价[D];广西医科大学;2013年

2 李燕玲;活性氧在癫痫持续状态诱导神经损伤中的信号机制研究[D];昆明医学院;2010年

3 李杏;50例癫痫持续状态的临床特点与影响近期疗效的相关因素分析[D];广西医科大学;2010年

4 邢大江;癫痫持续状态后一侧大脑半球受损的临床病例分析[D];大连医科大学;2013年

5 王丹;癫痫持续状态严重程度和认知功能的评估[D];昆明医学院;2011年

6 苗锐;癫痫持续状态的临床回顾性分析[D];第四军医大学;2011年

7 杨光;癫痫持续状态的病因学研究进展[D];重庆医科大学;2014年

8 岳宏;塞来昔布对大鼠癫痫持续状态后海马神经元凋亡的保护作用研究[D];山西医科大学;2008年

9 冯鸽;86例癫痫持续状态的临床分析[D];吉林大学;2011年

10 陈冠锋;乌灵菌粉对癫痫持续状态诱发大鼠空间记忆障碍的作用[D];浙江大学;2012年

本文编号：1679006