依达拉奉对局灶性脑缺血大鼠脑组织自噬的影响

发布时间：2018-03-29 12:02

本文选题：依达拉奉　切入点：脑缺血　出处：《承德医学院》2017年硕士论文

【摘要】：缺血性脑损伤作为目前危害人类健康的一种病理生理过程,严重影响了人们的生存时间及生活质量。依达拉奉是临床上一种常用的脑保护剂,可以清除自由基,抑制脑细胞的脂质过氧化,延迟神经细胞死亡,从而减轻脑缺血症状而发挥神经保护作用。近年来,自噬正成为研究脑缺血性疾病的热点而受到广泛的关注。自噬是一种由溶酶体介导的降解自身受损的蛋白质和细胞器的催化过程,但是有关依达拉奉对脑组织自噬的影响研究目前尚未明了。本实验旨在研究依达拉奉对脑缺血大鼠自噬及自噬相关蛋白Atg-5和Beclin1表达的影响,探究依达拉奉能否通过调控脑组织自噬发挥神经保护作用。目的:采用大脑中动脉栓塞法(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)制备大鼠脑缺血模型。确认脑缺血模型成功后进行药物干预,比较各组神经功能缺损评分,经过苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察大鼠脑组织的病理学改变,2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测脑梗死体积,Western法对Atg-5和Beclin1蛋白在脑缺血大鼠脑组织中的表达进行检测,RT-PCR法检测Atg-5和Beclin1的m RNA表达水平,探讨依达拉奉对局灶性脑缺血损伤后大鼠脑组织自噬的影响。方法:1健康雄性清洁级SD大鼠72只,体重250-330g,随机分为:假手术组、实验组和依达拉奉组,每组24只大鼠。参照Zea-Longa线栓法建立MCAO模型。其中实验组:行MCAO术;依达拉奉组:MCAO术+依达拉奉干预;假手术组:除不插入鱼线外,余同实验组。模型成功判断标准采用Longa法,评分1-3分的大鼠入选。各组均于模型制备后又随机分为1d、3d和7d三个观察时间点,每个时间点8只大鼠。照模过程中随机补充实验大鼠,保证各组大鼠数量均为8只。2采用HE染色观察各组的脑组织病理学改变。3运用TTC染色法观察脑梗死灶并计算梗死体积。4通过Western法检测大鼠脑组织Atg-5和Beclin1的蛋白表达。5经RT-PCR法测定各组大鼠Atg-5和Beclin1的m RNA表达水平。结果:1神经功能评分结果:假手术组1d、3d、7d三个时间点神经功能评分均为0分;实验组大鼠各个时间点的评分分别为:(2.80±0.42)分、(2.87±0.35)分、(2.75±0.32)分;依达拉奉组各个观察时间点评分依次为:(2.03±0.47)分、(1.84±0.41)分、(1.97±0.37)分。与实验组比较,依达拉奉组大鼠的神经功能缺损评分明显下降(P0.05)。2 HE染色观察各组大鼠脑组织病理形态学结果:假手术组大鼠脑组织中神经细胞排列规则,边界清晰、细胞核完整;实验组脑组织出现片状坏死,结构疏松,与周围正常组织分界清,细胞排列紊乱、边界不清、部分细胞核溶解固缩,7d时上述变化最为明显;依达拉奉组各个时间点较实验组相比上述表现均有改善。3 TTC法检测各组大鼠的脑梗死灶及梗死体积结果显示:(1)假手术组未见脑梗死灶,实验组和依达拉奉组有肉眼可见的梗死灶,且依达拉奉组较实验组脑梗死区域明显减小;(2)各组大鼠的脑梗死总体积分别是:0 mm3、(167.80±11.03)mm3、(19.40±12.12)mm3。实验组及依达拉奉组大鼠的脑梗死体积与假手术组的比较均明显增高(P0.05);依达拉奉组与实验组比较,脑梗死体积明显缩小(P0.05)。4 Western法检测各组大鼠脑组织中Atg-5和Beclin1的蛋白表达情况:(1)假手术组、实验组、依达拉奉组Atg-5蛋白在1d时表达结果依次是:0.46±0.02、0.97±0.05、0.73±0.03,在3d时表达结果为0.39±0.08、1.57±0.06、0.97±0.05,在7d时表达结果为:0.41±0.04、0.72±0.08、0.58±0.07;(2)上述三组Beclin1蛋白在1d时表达水平依次为:0.72±0.02、1.64±0.18、0.91±0.09,在3d时蛋白表达结果为0.67±0.04、2.18±0.17、1.64±0.18,在7d时蛋白表达结果依次为:0.69±0.05、1.02±0.24、0.82±0.17。假手术组各时间点Atg-5和Beclin1蛋白表达水平均无统计学意义(P0.05)。实验组和依达拉奉组Atg-5和Beclin1蛋白表达趋势一致,1d时增高,3d时表达呈高峰,7d下降,但仍高于假手术组(P0.05)。与假手术组比较,各时间点实验组和依达拉奉组中Atg-5和Beclin1蛋白表达水平明显升高(P0.05)。与实验组比较,各时间点依达拉奉组中Atg-5和Beclin1蛋白表达水平下降(P0.05)。5 RT-PCR法检测各组大鼠中Atg-5和Beclin1的m RNA在脑组织内的表达水平:(1)假手术组、实验组、依达拉奉组Atg-5m RNA在1d时表达水平依次是:0.46±0.04、1.51±0.05、1.01±0.04,在3d时表达结果为0.55±0.03、1.99±0.09、1.41±0.06,在7d时表达结果为0.51±0.02、1.20±0.04、0.89±0.06;(2)上述三组在1d时Beclin1m RNA表达结果分别是:0.76±0.04、1.68±0.12、1.02±0.07,在3d时表达结果为0.71±0.05、2.05±0.12、1.51±0.10,在7d时表达结果为0.85±0.06、1.41±0.20、1.02±0.11。假手术组各时间点Atg-5m RNA和Beclin1m RNA表达水平均无统计学意义(P0.05)。实验组和依达拉奉组Atg-5和Beclin1m RNA表达趋势相似,1d时增高,3d时表达呈高峰,7d下降,但仍高于假手术组(P0.05)。与假手术组比较,各时间点实验组和依达拉奉组中Atg-5和Beclin1m RNA表达水平明显升高(P0.05)。与实验组比较,各时间点依达拉奉组中Atg-5和Beclin1m RNA表达水平下降(P0.05)。结论:1正常大鼠脑组织内存在自噬,自噬相关蛋白Atg-5和Beclin1低水平表达。2大鼠局灶性脑缺血损伤可激活自噬,表现为Atg-5和Beclin1蛋白及m RNA表达的增加。3依达拉奉可能通过抑制自噬的过度激活而减轻脑缺血大鼠的神经功能损害,对发生的脑缺血性损伤起保护作用,可能是依达拉奉脑保护作用的机制之一。
[Abstract]:In recent years , the rats were randomly divided into three groups : sham operation group , experimental group and Edara group . The rats were randomly divided into two groups : sham operation group , experimental group and Edara group . The rats were randomly divided into three groups : sham operation group , experimental group and Edara group . Compared with the experimental group , the expression levels of Atg - 5 and Beclin1 in the experimental group were : 0 mm3 , ( 167.80 卤 11.03 ) mm3 and ( 19.40 卤 0.12 ) mm3 . Results : The expression levels of Atg - 5 and Beclin1 mRNA in the experimental group were significantly higher than those in sham operation group ( P0.05 ) .

【学位授予单位】：承德医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R741

【参考文献】