尿激酶对大鼠交通性脑积水的干预效应及机制研究

发布时间：2018-04-06 23:09

  本文选题：高岭土　切入点：脑积水　出处：《第三军医大学》2017年硕士论文

【摘要】：交通性脑积水是一种常见的继发于脑膜炎等颅内感染性疾病和脑室出血、蛛网膜下腔出血等颅内出血性疾病的神经系统疾病。其多是由脑脊液循环或引流障碍所致,其最大的特点是脑室系统的病理性扩张。目前临床上对交通性脑积水的主要治疗方法是脑脊液分流术,然而脑脊液分流术并不是交通性脑积水理想的治疗方式。因为分流术有很多诸如引流管堵塞和感染等的并发症,这些并发症将导致高复发率和高神经功能致残率。所以,我们迫切需要找到对脑积水行之有效的治疗手段。前期研究表明以过多的细胞外基质沉积为特点的广泛蛛网膜下腔纤维化与出血后脑积水以及其他类型的交通性脑积水密切相关。因此,以蛛网膜下腔纤维化为靶点可能是治疗交通性脑积水的有效途径。尿激酶型纤溶酶原激活剂,简称尿激酶(urokinase-type plasminogen activator,u PA),是一种丝氨酸蛋白酶,它能将纤溶酶原激活为纤溶酶。纤溶酶是一种有活性的酶,它能降解纤维蛋白以及其他细胞外基质成分。据报道,激活尿激酶/纤溶酶系统对实验性肺纤维化、呼吸道纤维化以及肝纤维化动物模型都有明显的改善作用。而且研究表明脑室内的纤维蛋白溶解也能有效改善脑室出血的预后。因生产工艺问题u PA从1999年开始在美国很少使用,但是国内临床运用却很普遍,其安全性和有效性都得到了一定的肯定。作为一种有效的纤溶治疗药物,u PA近些年也逐渐受到国内外一些研究者的关注。u PA介导的纤溶作用显著地促进蛛网膜下腔出血、脑室出血和脑出血动物模型的血肿吸收并改善其预后。然而到目前为止,u PA对交通性脑积水的治疗效果仍然不清楚。由此,本研究采用高岭土诱导建立大鼠交通性脑积水模型,经侧脑室内注射u PA进行干预,以验证u PA纤溶效应能否减轻实验动物蛛网膜下腔的纤维化,从而缓解交通性脑积水,并减轻继发脑损伤及神经功能障碍。一、大鼠交通性脑积水模型的建立及评估。目的建立、评估大鼠交通性脑积水模型,并在动物模型的基础上观察实验动物蛛网膜下腔的病理改变。方法实验SD大鼠被随机分为对照组和高岭土组。高岭土组从大鼠基底池缓慢注入25%的高岭土悬浮液30μl,对照组采用相同方法注入等量生理盐水。所有实验动物于建模后28天行头部磁共振(magnetic resonance imaging,MRI)扫描评估脑室扩张情况,后处死留取脑组织标本运用免疫荧光及蛋白免疫印迹(Western blot,WB)方法检测实验动物蛛网膜下腔纤维粘连蛋白和层粘连蛋白的沉积情况。结果1.MRI结果表明,通过基底池注入高岭土悬浮液,高岭土组实验动物脑室较对照组明显扩张(P0.05)。2.免疫荧光显示对照组动物蛛网膜下腔无明显纤维粘连蛋白及粘连蛋白沉积,而高岭土组蛛网膜下腔两种蛋白大量沉积。3.WB检测结果同样表明,与对照组相比,高岭土组动物蛛网膜下腔纤维粘连蛋白及粘连蛋白的表达量显著增加(P0.05)。结论通过基底池注入高岭土悬浮液能成功诱导交通性脑积水。以纤维粘连蛋白及粘连蛋白等细胞外基质(extracellular matrix,ECM)沉积为特点的蛛网膜下腔纤维化是交通性脑积水的重要发病机制,以此为靶点有望成为脑积水治疗的新方向。二、尿激酶对大鼠交通性脑积水的干预效应及机制研究。目的建立高岭土诱导的大鼠交通性脑积水模型后,经侧脑室注射u PA,观察u PA对脑积水的干预效应,并进一步探讨u PA减轻高岭土诱导的交通性脑积水的可能机制。方法研究动物被随机分成对照组、高岭土组、生理盐水组、尿激酶组。尿激酶组于建模后和建模后3天分别经侧脑室用微量泵缓慢泵入2μl 5IU/μl的u PA,生理盐水组则在相同时间经侧脑室给予同剂量生理盐水。部分实验(n=6)动物于建模后3天、14天和28天行头部MRI扫描观察脑室扩张程度,其余实验动物(n=6)于建模后23天到28天行行为学检测。所有在术后28天处死并留取脑组织标本,运用免疫荧光和WB方法检测纤维粘连蛋白、层粘连蛋白和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达水平。结果1.通过脑室内给药,u PA能显著缓解高岭土诱导的交通性脑积水动物的脑室扩张程度(P0.05)。2.免疫荧光及WB结果表明纤维粘连但白和层粘连蛋白量在高岭土组和生理盐水组中比对照组明显增多(P0.05)。而u PA干预能显著降低纤维粘连但白和层粘连蛋白量(P0.05)。3.免疫荧光及WB结果显示与对照组相比,高岭土组和生理盐水组动物脑组织GFAP表达量显著增加(P0.05),而尿激酶组较生理盐水组动物GFAP表达明显减少(P0.05)。4.高岭土和生理盐水组动物神经认知功能较对照组差(P0.05),而u PA能明显改善高岭土诱导的交通性脑积水动物的神经认知功能(P0.05)。结论侧脑室注射u PA能明显减轻高岭土诱导的交通性脑积水大鼠的脑室扩张程度,进而减轻继发性脑损伤和改善神经认知功能,其可能机制为u PA通过降解细胞外基质成分而降低蛛网膜下腔纤维化程度。因此,u PA有望为交通性脑积水的药物治疗带来新的希望。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R742.7

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本文编号：1719317