热预处理后嗅鞘细胞上清液诱导神经干细胞向神经元定向分化的研究

发布时间：2018-04-10 20:05

  本文选题：嗅鞘细胞 + 热预处理　； 参考：《湖南师范大学》2014年硕士论文

【摘要】：目的：近年来大量研究证实嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells, OECs)与神经干细胞(neural stem cells, NSCs)联合移植治疗中枢神经损伤具有显著疗效。但细胞移植后,NSCs向神经元分化效率低是制约细胞移植疗效的因素之一。本实验拟在体外运用热预处理的方法提高OECs条件培养基诱导NSCs向神经元分化比例,并探讨对OECs热预处理促进NSCs向神经元分化的机制。 方法：新生3d昆明小鼠,提取嗅球,分离、培养嗅鞘细胞并鉴定,再将纯化的OECs分为3组。370EC组：无血清条件培养基下OECs置于37℃培养48h；400EC组：无血清条件培养基下OECs置于40℃培养箱预处理6h,再置于37℃培养42h；400EC+R组：在OECs无血清条件培养基里加入20μg低氧诱导因子-1α(HIF-1a)抑制剂(YC-1),于40℃培养箱预处理6h,再置于37℃培养42h。MTT法检测预处理后OECs细胞活力。收集各组OEC上清液(OCM),标记为370CM,400CM,400CM+R。取P3代小鼠神经干细胞系C17.2细胞,培养至80%细胞融合,清除含血清培养基后分别加入三组OEC上清液,通过免疫荧光计数、Western-blot方法检测C17.2NSCs向神经元分化比例情况,并用RT-PCR、Western-blot和ELISA方法分别检测OECs及OCM中HIF-1a及其靶基因EPO、VEGF表达。 结果：MTT细胞活力检测示3组OECs的细胞活力无显著差异。NSCs在加入370CM组、400CM组和400CM+R组上清液诱导后,通过免疫荧光计数发现,400CM组中分化细胞神经元标志物β微管蛋白(β-tublinⅢ, Tuj-1)、微管相关蛋白2(microtubule-associated protein2, MAP-2)阳性细胞数目(31.40±1.08%、31.80±1.60%)显著高于370CM组(23.60±1.36%、22.80±1.66%)和400CM+R组(22.60±1.50%、24.00±2.30%),370CM与400CM+R两组之间Tuj-1、MAP-2阳性细胞数目无统计学差异。Western-blot也证实,在400CM诱导组中,Tuj-1蛋白表达显著高于370CM组和400CM+R组,而370CM和400CM+R两组之间Tuj-1、MAP-2蛋白表达无显著差异。RT-PCR结果示400EC组HIF-1a及其下游靶基因EPO、VEGF转录水平较370EC.400EC+R组明显增高；Western blot结果提示400EC组HIF-1a蛋白表达含量显著高于370EC、400EC+R组；Elisa检测发现400CM组中EPO、VEGF含量显著高于370CM、400CM+R组。 结论：OECs经热预处理后,其上清液能更有效的诱导NSCs向神经元定向分化,提高其分化比例。热预处理后HIF-1a表达上调是促进NSCs向神经元定向分化的重要因素,HIF-1a下游靶基因EPO、VEGF激活和表达可能是提高NSCs向神经元分化比例的机制之一。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R741

【参考文献】

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本文编号：1732711