VEGF缓释微球联合颞肌贴敷术对慢性脑缺血大鼠血管生成的影响

发布时间：2018-04-17 22:11

  本文选题：慢性脑缺血 + 血管内皮生长因子　； 参考：《河北医科大学》2014年硕士论文

【摘要】：目的：研究使用聚乳酸-羟基乙酸共聚物（poly（lactide-co-glycolide），PLGA）制成VEGF缓释微球，探索其联合颞肌贴敷术对慢性脑缺血大鼠血管生成的影响，为临床治疗烟雾病等慢性脑缺血疾病提供新的思路。 方法： 1缓释微球的制备及性质鉴定：采用W1/O/W2复乳溶剂挥发法制作微球；使用扫描电镜观察微球的表面形态结构；采用MicroBCA法测定微球中药物的载药量和包封率，并对微球的体外释药性能进行研究；将用罗丹明标记的微球注入大鼠颞肌组织，分别于第10天和第30天取颞肌组织行冰冻切片，在荧光显微镜下观察。 2VEGF缓释微球联合颞肌贴敷术对血管生成的影响：采用结扎双侧颈内动脉及一侧椎动脉的方法制造大鼠慢性脑缺血模型；在造模后第14天，根据大鼠分组分别行颞肌贴敷术及缓释微球注射。各组于颞肌贴敷术后30天行Morris水迷宫实验，以评价各组大鼠学习记忆能力；水迷宫实验结束后，采用激光多普勒血流仪测定颞肌贴敷区域脑血流量，行大鼠脑血管造影术，观察颅内外血管情况。造影结束后处死大鼠，采用免疫组化方法测定大鼠颞肌组织及脑组织的微血管密度，采用蛋白印迹法（Western-blot法）测定大鼠颞肌组织及脑组织的α-SMA的表达情况。 结果： 1VEFG-PLGA缓释微球的性质：在扫描电镜下可观察到，VEGF-PLGA为圆形球体，，形态较一致，表面光滑无孔隙，其粒径约为4-10μm；VEGF-PLGA微球的平均载药量和包封率分别为0.0255%和85.07%。VEGF-PLGA微球第一天突释率平均值为20%，微球在30天内能持续释放VEGF，20天累积释药率可达80%，整个释药过程较为平稳；其在组织中可存在较长时间，表现有共聚物的自然降解。 2行为学观察结果及脑血流量检测结果：与3-VO组相比，其余各组大鼠的学习和记忆潜伏期均明显缩短，且第3-5天差异有统计学意义（**P0.01）。空间探索实验亦显示：各组穿越平台次数和目标象限停留时间与3-VO组相比差异有统计学意义（**P0.01）。但EMS组和EMS+VEGF组之间的学习和记忆成绩未见明显差异。假手术组、3-VO、EMS、EMS+VEGF组脑血流量值（×10-2ml g-1/min）分别为50.13±10.43，20.86±7.319，33.59±5.830和47.97±9.756。相比于3-VO组，其余各组脑血流量均较多，差异有统计学意义（*P0.05）。同时，EMS+VEGF组与EMS组相比，其脑血流量值有增高，差异有统计学意义（*P0.05）。 3脑血管造影术结果：可见假手术组及3-VO组颈外动脉分支清晰，明确，基本无小血管增生，EMS组颈外动脉分支杂乱，可能与行颞肌贴敷术损伤血管有关，而在EMS+VEGF组可见有明显血管增生，且数量较多。 4免疫组化及相关蛋白检测结果：免疫组化结果显示，EMS+VEGF组脑组织及颞肌组织微血管密度较EMS组及3-VO组均有所增加，差异有统计学意义。各组大鼠脑组织中sham组α-SMA表达较其余三组高，差异有统计学意义（***P0.01），而3-VO、EMS、EMS+VEGF组α-SMA表达无明显差异。而在颞肌组织中，与EMS+VEGF组相比，EMS、3-VO组α-SMA表达显著减少，差异有统计学意义（**P0.01）。与sham组相比，EMS、3-VO组α-SMA表达亦显著减少，差异有统计学意义（##P0.01），但EMS+VEGF组与sham组无明显差别。 结论： 本实验证实了使用PLGA制成的VEGF缓释微球具有良好的缓释能力，适合局部应用，能明显的促进慢性脑缺血大鼠的颅内外血管生成；未来，间接使用VEGF-PLGA缓释微球可能会对烟雾病等慢性脑缺血患者有强效的治疗作用。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R743.31

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本文编号：1765512