VE-cadherin磷酸化在冲击流场引发血管内皮损伤中的作用

发布时间：2018-04-20 15:37

  本文选题：冲击流场 + T型流室　； 参考：《南昌大学》2016年硕士论文

【摘要】：目的:血流动力学因素引起血管内皮损伤、血管壁炎症反应所致的血管壁重构是颅内动脉瘤形成的主要病理生理环节,我们前期研究表明动脉瘤形成过程中VE-cadherin与p120-catenin表达同时降低,血管内皮细胞和平滑肌细胞数量减少;本研究通过体外培养的细胞在冲击流场作用下,检测VE-cadherin磷酸化诱导的120ctn及其伴侣分子等在不同冲击时间下的相互影响,探讨VE-cadherin磷酸化与血管内皮细胞损伤和细胞炎症的关系及调控机制。方法:自行设计的T型流室系统可模拟血管分叉处的血流环境,并通过提供不同流速的冲击流体,在流室内创造不同条件的血流动力学环境。体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)及运用重组慢病毒Y658位点磷酸化(Y658E)VE-cadherin突变体构建[A tyrosine to glutamic acid(Y to E)]后,将突变体转染HUVEC。将细胞种植在22×50mm的载玻片上,待细胞融合度达到85-95%后将载玻片置入流室,在250ml/min和500ml/min的流速作用下,观察3小时、6小时和12小时处理后,HUVEC细胞形态、生长方式,及VE-Cadherin、P120ctn、Kaiso、MMP-2、α-catenin和β-catenin的表达情况。结果:正常HUVEC在冲击流作用12小时后仍可维持正常贴壁生长。加载250ml/min的流速,作用12小时后冲击点及其周围的细胞仍维持着多边形,细胞分布未见明显改变。加载流速500ml/min,6小时后冲击点及其周围的细胞仍维持着多边形,细胞分布未见明显改变。12小时后,可见冲击点处的细胞过度融合,细胞间隙变窄。高切应力(WSS)和高切应力梯度(WSSG)区的细胞密度下降且形态被拉长,部分细胞向下游迁徙,排列与冲击流方向平行一致。两种流速作用12h后,P120ctn、VE-Cadherin、Kaiso和α-catenin表达下降,β-catenin表达未见明显变化,MMP-2表达升高;其中P120ctn、VE-Cadherin、Kaiso及MMP-2的变化具有统计学意义(P0.05)。重组慢病毒Y658磷酸化(Y658E)VE-cadherin突变体转染后的HUVEC在流室内生长时间短于正常HUVEC。加载250ml/min的流速,1小时以内冲击点及其周围的细胞仍维持着多边形,但高WSS及高WSSG区域部分细胞开始向下游移动并聚集,细胞部分随流体方向排列。加载500ml/min时,30分钟以内击点及其周围的细胞仍维持着多边形,细胞分布未见明显改变。1小时后,可见高切应力(WSS)和高切应力梯度(WSSG)区的细胞密度明显下降且形态被拉长,大量细胞向下游迁徙并集聚,排列与冲击流方向平行一致。加载两种流速作用后,P120ctn、Kaiso、a-catenin表达下降,b-catenin表达无明显变化,MMP-2表达升高;其中P120ctn、Kaiso以及MMP-2的表达改变具有统计学意义(P0.01)。空病毒对照组在加载250ml/min和500ml/min流速后,细胞形态和生长方式与正常对照组相比未见明显改变,VE-Cadherin、P120ctn、Kaiso、a-catenin,b-catenin和MMP-2的表达与正常对照组相比也未见明显改变(P0.05)。结论:冲击流场作用下血管内皮细胞间黏附连接的损害多发生于高WSS及高WSSG的区域。血流动力学的改变可以引起血管内皮细胞在形态、生长方式及相关蛋白表达的改变,进而导致血管内皮细胞间黏附连接稳定性的下降及相关致炎因子的表达改变。VE-cadherin磷酸化明显降低了HUVEC细胞间黏附的稳定性。
[Abstract]:Objective : To investigate the relationship between vascular endothelial injury and vascular wall remodeling induced by vascular endothelial injury and vascular wall inflammation . The expression of P120ctn , Kaiso and MMP - 2 was significantly lower than that in the normal control group ( P0.05 ) .

【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R743

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本文编号：1778371