Npas4在癫痫模型大鼠脑中的表达及其机制

发布时间：2018-04-21 12:05

  本文选题：Npas4 + 癫痫　； 参考：《重庆医科大学》2014年硕士论文

【摘要】：第一部分Npas4在癫痫模型大鼠脑中的表达研究 目的：研究Npas4在氯化锂-匹罗卡品点燃的癫痫模型大鼠脑组织中表达的时空变化规律，探讨与癫痫发作关系。 方法: 1、选取成年雄性SD大鼠共64只，随机分成1个对照组（n=8）和7个实验模型组（亚组：6小时，24小时，72小时，7天，14天，30天和60天；各组n=8）腹腔注射氯化锂-匹罗卡品构建点燃颞叶癫痫动物模型。 2、分别用免疫荧光双标，免疫组化及Western blot技术检测Npas4在点燃后不同时间点海马及皮质等脑组织中的表达的时间及空间的变化和发展规律。 结果： 1、免疫荧光双标检测Npas4的表达部位：点燃后大鼠海马神经元胞核和胞浆中Npas4均有表达，但在神经胶质细胞中不表达。 2、免疫组化检测Npas4的表达水平：免疫组化结果显示Npas4主要在神经元胞核中表达，极少部分在神经元胞浆表达。Npas4主要在皮质和海马中表达，在海马主要在CA1区、CA3区和DG区的神经元中表达。与正常对照组相比，在模型组中，可以观察到在点燃后6小时、24小时、72小时、7天表达增高（P0.05），在24小时达高峰，在30天和60天时表达明显降低（P0.05）。 3、Western blot检测Npas4蛋白的表达规律：Npas4在急性期显著增高，从6h时间点开始增高，在24h达高峰，从第7天开始降低，与正常组相比，在恢复期（7d、14d）和慢性期（30d、60d）表达明显降低（P0.05）。 结论：在癫痫模型大鼠脑中Npas4在急性期表达增加，在恢复期和慢性期表达降低，这些变化提示Npas4可能参与了癫痫的发生和发展过程。 第二部分Npas4在癫痫模型大鼠痫性发作中的机制 目的：通过siRNA干扰技术特异性抑制Npas4表达后，探讨降低Npas4表达对大鼠癫痫发作的影响。 方法：选择雄性的健康成年的SD大鼠32只，随机分成4个组（n=8），分别为正常对照组、生理盐水对照组、空载体组、siRNA干扰组。除正常对照组外，其它三组利用海马立体定位仪对大鼠海马区域注射相应药物，注药7天后腹腔注射氯化锂-匹罗卡品观察各组大鼠的点燃率、潜伏期、发作频率、持续时间等改变。 结果： 1.大鼠癫痫发作潜伏期观察:各组大鼠腹腔注射匹罗卡品（40mg/kg）后观察行为学结果显示，各组发作潜伏期：正常组（26.40±6.10）min、盐水组（26.50±4.89）min、空载体组（28.80±3.96）min和siRNA干扰组(15.71±3.86)min，siRNA干扰组平均发作潜伏期较三个对照组缩短,差异有统计学意义（P0.05），三个对照组之间比较差异无统计学意义。 2.大鼠痫性发作频率统计：通过统计各组大鼠注射匹罗卡品后2小时内的发作频率结果显示：各组大鼠Racine评分4级及以上的痫性发作次数秩均值分别为：正常组9.30次，生理盐水组8.75次，空载体组10.40次，siRNA干扰组17.86次。Npas4干预组发作次数明显增高，差别有统计学意义（P0.05）。 3.大鼠痫性发作持续时间观察：统计大鼠Racine评分4级及以上发作持续时间，各组的平均持续时间如下：正常组（11.67±4.13）min，生理盐水组（10.40±3.85）min，空载体组（10.40±4.88）min，siRNA干扰组（19.86±7.43）min。前三组差别无统计学意义（P0.05），siRNA干扰组发作持续时间较前三组延长，差别有统计学意义（P0.05）。 4.大鼠痫性发作的点燃率统计：观察四组大鼠注射匹罗卡品2小时后的发作率分别为：正常组62.5%，生理盐水组75%，，空载体组62.5%，siRNA干扰组87.5%。siRNA干扰组发作率较前三组增高，差别有统计学意义（P0.05）。 5.siRNA干预后Npas4蛋白表达: siRNA干预后7天WB结果显示siRNA干扰组中Npas4蛋白表达量较正常组、生理盐水组、空载体组明显降低，差别有统计学意义（P0.05）。 结论：siRNA特异性抑制Npas4表达后，匹罗卡品诱发的大鼠痫性发作的潜伏期减短，发作频率、持续时间、点燃率均增高。Npas4在癫痫发病中可能起抑制作用。
[Abstract]:The first part is the expression of Npas4 in the brain of epileptic rats.
Objective: To study the spatiotemporal variation of Npas4 expression in the brain tissue of epileptic rats kindled by lithium pilocarpine, and to explore the relationship between seizure and seizure.
Method:
1, 64 adult male SD rats were randomly divided into 1 control groups (n=8) and 7 experimental model groups (subgroup: 6 hours, 24 hours, 72 hours, 7 days, 14 days, 30 days and 60 days; each group n=8) was intraperitoneally injected with lithium pilocarpine to build the kindling temporal lobe epilepsy animal model.
2, the time and space of the expression of Npas4 in the hippocampus and cortex in different time points after kindling were detected by double immunofluorescence, immunohistochemistry and Western blot, respectively.
Result锛

本文编号：1782366