透明质酸酶治疗早产兔生发基质—脑室内出血的实验研究

发布时间：2018-04-23 03:26

本文选题：透明质酸酶 + 生发基质-脑室内出血　；参考：《河北医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:生发基质-脑室内出血(Germinal matrix intraventricular hemorrhage,GM-IVH)是新生儿期最常见的颅内出血类型,同时也是造成早产儿脑白质受损的重要原因。随着医学进步,超早产儿的成活率逐步增长,GM-IVH患儿数量也趋之升高。严重的GM-IVH患儿会遗留如脑瘫、学习困难,认知功能障碍等神经系统后遗症,即便是轻度颅内出血,也可对患儿预后造成一定影响,且目前仍无有效治疗手段。近年来随着对GM-IVH继发性损伤研究的深入,人们发现GM-IVH后的继发炎症反应可对脑组织造成不可逆性损伤。透明质酸是细胞外基质的主要成分,同时也是一种炎性介质,与受体CD44结合后会介导炎症反应的进行,在许多炎症性疾病中可见透明质酸的积累。透明质酸酶是透明质酸的特异性水解酶,有研究证明使用透明质酸酶能够治疗中枢神经系统炎性疾病。那么,通过应用透明质酸酶是否能够减轻GM-IVH后的继发炎性损伤,关于这方面的研究国内外少有报道。本实验通过应用早产兔GM-IVH动物模型,旨在研究:1.GM-IVH早产兔脑组织中透明质酸受体CD44及肿瘤坏死因子(TNF-a)的表达情况;2.透明质酸酶干预后GM-IVH早产兔脑组织中透明质酸受体CD44及TNF-a的表达情况;方法:1选取42只孕29天新西兰大白兔所生早产乳兔(正常孕足月乳兔为32天),生后迅速保暖,并进行奶粉饲养。随机分为正常组、模型组(单纯GM-IVH模型)和治疗组(GM-IVH模型+透明质酸酶),每组各14只。参照腹腔注射丙三醇诱发GM-IVH的步骤,制备早产兔GM-IVH动物模型。具体步骤为:对模型组和治疗组早产兔在出生后3小时内进行50%丙三醇(10ml/Kg)腹腔注射,制作GM-IVH动物模型,正常组不进行任何处理。在生后1天内对三组早产兔进行颅脑超声检查,观察治疗组和模型组早产兔是否伴有颅内出血。对治疗组早产兔在生后第2天、第4天、第6天给予侧脑室注射透明质酸酶(1U/μL),剂量为20μL/kg,对照组在相同时间点给予侧脑室注射生理盐水,剂量为20μL/kg,正常组不予任何处理,精心饲养各组早产兔。2将每组早产兔随机分为第3天、第7天两个亚组,每组7只,在第3天、第7天对各组早产兔进行麻醉处死,迅速剥离脑组织,观察标本形态后在冰上快速提取脑室周围脑组织并对标本进行编号,将一部分标本放入-80℃冰箱中保存,供蛋白印迹实验使用。其余标本置于4%多聚甲醛中固定,进行免疫组化染色和苏木精-伊红染色。3应用免疫组化法观察三组标本中肿瘤坏死因子、CD44的表达是否存在差异。采取蛋白印迹实验对比三组标本中肿瘤坏死因子、CD44的表达情况。4统计方法:使用SPSS 17.0统计分析软件及Microsoft Excel 2003软件进行统计学分析,计量资料若符合正态分布,则用均数±标准差(x±SD)描述,比较前先进行方差齐性检验,若方差齐,两个样本均数比较使用独立样本t检验(Independent Samples Test),多样本均数比较采用LSD检验,若不满足方差齐性检验则采用秩和检验(rank-sum test)的方法。检验水准设为0.05,P小于0.05提示差异有统计意义。结果:1成功复制GM-IVH动物模型对怀孕29天的孕兔进行剖腹产,获得29天早产兔,在生后三小时内给予丙三醇腹腔注射,诱发颅内出血。通过对各组早产兔完善颅脑超声检查、观察早产兔大体标本形态及进行显微镜观察等途径证明成功复制了GM-IVH早产兔动物模型。2早产兔脑组织中CD44的表达模型组GM-IVH早产兔脑组织标本中CD44的表达在生后第3天最高,第7天降低,差异有统计学意义(P0.05)。治疗组和正常组早产兔脑组织中CD44的表达在生后第7天高于第3天,差异达统计学意义(P0.05)。在同时间段比较(3天、7天),模型组兔脑组织标本中CD44表达最高,正常组最低,治疗组位于两者之间,差异有统计学意义(P0.05)。3早产兔脑组织中TNF-a的表达模型组和治疗组GM-IVH早产兔脑组织标本中TNF-a的表达在生后第3天高于生后第7天,差异有统计学意义(P0.05)。正常组早产兔脑组织标本在生后第3天和第7天比较,TNF-a的表达无差异(P0.05)。在相同时间段里(3天、7天),TNF-a在模型组脑组织标本中表达最高,其次为治疗组,正常组表达最低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:早产兔发生GM-IVH后脑组织中TNF-a含量升高,提示GM-IVH存在继发性炎症反应,提示随时间进展,炎症反应由强逐渐减弱。此外,早产兔GM-IVH后同样存在透明质酸受体CD44的高表达,随时间进展CD44表达逐渐降低,提示GM-IVH后脑组织中存在透明质酸的积累,透明质酸可与其受体CD44结合后共同参与GM-IVH后的继发炎症反应。当对GM-IVH早产兔给予侧脑室注射透明质酸酶后,发现TNF-a和CD44在相同时间段里(3天、7天)治疗组中表达低于模型组,提示透明质酸酶可以通过水解透明质酸来抑制CD44的表达活性,继而减轻GM-IVH后的继发炎症反应。
[Abstract]:Objective : To study the expression of hyaluronic acid receptor CD44 and tumor necrosis factor ( TNF - a ) in brain tissue of premature infants . The results showed that the expression of CD44 in the brain tissue of premature rabbit was higher than that in the third day after birth , and the difference was statistically significant ( P0.05 ) . It was suggested that the expression of hyaluronic acid in the brain tissue was lower after GM - IVH . The expression of hyaluronic acid in the brain tissue was lower than that in the model group after GM - IVH was injected into the lateral ventricle .

【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R743.34

【参考文献】