TGF-β1、MMP9及铁代谢变化在大鼠脑室出血后脑室损伤及细胞凋亡中的作用

发布时间：2018-04-26 03:35

  本文选题：脑室出血 + 脑室损伤　； 参考：《吉林大学》2015年博士论文

【摘要】：目的： 观察IVH后TGF-β1、MMP9及脑内铁代谢的变化，探讨其在IVH后脑室损伤及细胞凋亡中的作用。方法： （1）健康雄性Wistar大鼠84只，随机分为：正常组，盐水对照组术后1d、3d、7d、28d，脑室注血组术后1d、3d、7d、28d共9组，130ul自体尾动脉血二次注射法制作大鼠右侧侧脑室出血模型，造模后不同时间点，大体标本、扫描电镜及HE染色法评价脑室损伤情况； （2）Wistar大鼠108只，随机分为：正常组、盐水对照组术后1d、3d、7d、28d，脑室注血组术后1d、3d、7d、28d共9组，荧光实时定量PCR法检测TGF-β1mRNA水平，Western blot法检测MMP9表达变化； （3）Wistar大鼠25只，随机分为盐水对照组和脑室注血组术后1d、3d、7d、28d（n=5）。红菲绕啉法测定血清及脑组织非血红素铁含量； （4）Wistar大鼠162只，随机分为正常组、盐水组术后1d、3d、7d、28d，脑室注血组术后1d、3d、7d、28d共9组，荧光实时定量PCR、Western Blot及免疫荧光染色法检测脑室周围铁蛋白（Fn）、转铁蛋白（Tf）、转铁蛋白受体1（TfR1）、二价金属离子转运体1（DMT1）、铁调节蛋白2（IRP2）、血红素加氧酶1（HO1）表达变化；8-OHdG免疫荧光染色及Tunel法检测细胞凋亡情况； （5）Wistar大鼠18只，随机分为对照组、脑室出血后去铁胺治疗组和盐水对照组。电镜下观察脑室壁结构变化，Tunel法检测细胞凋亡情况。 结果： （1）对照组脑室及其周围组织无明显变化，室管膜细胞排列整齐，组织结构清晰，脑室注血组大鼠术后1d大体及HE染色见右侧脑室内充满积血，脑室周围白质水肿，室管膜细胞排列紊乱，松散；术后3d侧脑室积血减少，室管膜部分断裂，，可见脑室膜细胞增生；术后28d胶质细胞增生及室管膜断裂均较明显。电镜下对照组纤毛致密，排列规则有序，基膜完整；脑室注血组纤毛紊乱、断裂，基膜脱落逐渐加重。 （2）术后1天TGF-β1mRNA水平即明显上升，显著高于盐水组（P0.01），术后3天TGF-β1mRNA水平较术后1d明显下降（P0.001），但仍高于对照组（P0.05），术后7d TGF-β1mRNA水平再次上调，形成第二高峰，术后28dTGF-β1mRNA水平再次下降，但仍高于盐水对照组，差异具有统计学意义（P0.05）；术后1d MMP9蛋白含量即开始上升，与盐水组比较差异具有显著性（P0.05），随术后时间延长，MMP9蛋白表达持续增加，至术后28天达高峰，术后28天MMP9蛋白含量与盐水组比较差异显著（P0.001）。 (3)IVH后血清铁含量组间比较差异具有显著性（P0.01），但各组与对照组相比均无差别。IVH术后1d脑铁含量即明显增加，术后7d表达量最高，之后持续高表达至术后28d。 (4)Tf mRNA水平随术后时间延长有升高趋势，术后1d即显著高于对照组，术后3d达高峰，之后逐渐下降，28d时明显低于对照组。Tf术后1d表达较对照组增多，3d达高峰，7d开始下降，至28d表达量明显低于对照组（P0.01）。TfR1术后3d表达量下降，之后表达上调，术后28d与术后7d相比无明显变化但均高于对照组。DMT1mRNA水平术后第1d明显低于对照组（P0.01），随术后时间延长继续下降，术后7d表达量最低，术后28d较前恢复，与对照组比较无明显变化。DMT1术后1d表达与对照组比较无明显变化，之后随时间延长表达量下降，至术后7d最低，明显低于对照组，术后28d基本恢复正常，与对照组相比无明显差异。IRP2mRNA水平术后第1d较对照组下降，之后持续下降至术后7d达到最低水平，术后28d较前恢复，但仍明显低于对照组（P0.001）。IRP2蛋白术后1d表达与对照组比较无明显变化，之后随时间延长表达量下降，术后3d表达量最低，术后28d基本恢复正常，与对照组相比无明显变化。术后1d HO1表达量较对照组明显上升，3d略有下降，但与术后1d相比无显著性差异；术后7d表达较3d明显下降，术后28d表达仍高于正常组。 （5）8-OHdG在对照组阳性率较低，随术后时间延长，阳性率持续增加，术后7d与28d相比无明显差异，均明显高于正常。海马及脑室周围组织Tunel染色变化基本一致，对照组阳性率较低，术后1d阳性率即较对照组增高，之后阳性表达持续增加，至术后28d阳性率最高。 （6）脑室出血后7d盐水治疗组电镜下脑室顶璧纤毛变细、断裂明显，基膜脱落，基膜下组织裸露；DFO治疗组纤毛断裂减轻，基膜脱落不明显；Tunel染色阳性率DFO治疗组较盐水组明显降低。结论： （1）IVH后脑室周围组织病理改变早期以水肿为主，后期增生逐渐明显； （2）IVH后脑室损伤、扩张可能与TGF-β1、MMP9表达失衡有关； （3）铁代谢紊乱在IVH后脑室损伤及细胞凋亡中发挥重要作用； （4）去铁胺治疗能减轻IVH后脑室壁损伤及细胞凋亡。
[Abstract]:Objective:
To observe the changes of TGF- beta 1, MMP9 and iron metabolism in the brain after IVH, and to explore its role in ventricular injury and apoptosis after IVH.
(1) 84 healthy male Wistar rats were randomly divided into normal group, saline control group after operation 1D, 3D, 7d, 28d, 1D, 3D, 7d, 28d in the group of cerebral blood injection group 9 groups, 130ul autologous tail artery blood two injection method to make the right lateral ventricle hemorrhage model of rats, general specimen, scanning electron microscope and HE staining method to evaluate the damage of the ventricle ;
(2) 108 Wistar rats were randomly divided into normal group, 1D, 3D, 7d, 28d and 9 groups of 1D, 3D, 7d, 28d after operation in the saline control group, and the fluorescence real-time quantitative PCR method was used to detect TGF- beta 1mRNA level.
(3) 25 Wistar rats were randomly divided into saline control group and cerebral ventricular injection group (1D, 3D, 7d, 28d (n=5)). The content of non heme iron in serum and brain tissue was measured by red phenanthroline.
(4) 162 Wistar rats were randomly divided into normal group, 1D, 3D, 7d, 28d and 9 groups of 1D, 3D, 7d, 28d after operation in the saline group. The fluorescence real-time quantitative PCR, Western Blot and immunofluorescence staining were used to detect the ferritin around the ventricle, transferrin receptor 1, two valence metal ion transporter 1, and iron regulating protein 2. RP2), the expression of heme oxygenase 1 (HO1) was changed, 8-OHdG immunofluorescence staining and Tunel assay were used to detect apoptosis.
(5) 18 Wistar rats were randomly divided into the control group, the iron amine treatment group and the saline control group after the ventricular hemorrhage. The changes of the ventricular wall structure were observed under the electron microscope, and the apoptosis of the cells was detected by the Tunel method.
Result锛

本文编号：1804343