硫化氢保护脑缺血后的血脑屏障损伤

发布时间：2018-05-11 19:37

  本文选题：脑缺血 + 硫化氢　； 参考：《苏州大学》2014年硕士论文

【摘要】：第一部分硫化氢对小鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的保护作用 目的：观察硫化氢（H2S）对小鼠脑缺血再灌注损伤是否具有血脑屏障保护作用。 方法：利用两种结构不具相关性的H2S供体ADT（5-(4-methoxyphenyl)-3H-1,2-dithiole-3-thione，ADT）及NaHS研究H2S是否在脑缺血后保护血脑屏障。雄性ICR小鼠接受1小时大脑中动脉阻塞（transient middle cerebral artery occlusion，tMCAO），再灌注3小时后随机分为三组，腹腔注射溶剂（Vehicle，，Veh）、ADT（50mg/kg/day）或NaHS (25μmol/kg/day)。用亚甲基蓝方法检测ADT和NaHS注射后小鼠血液H2S水平；以TTC(2，3，5—氯化三苯基四氮唑)染色法测定小鼠脑梗死体积，以Longa法评估神经行为学功能，以伊文思蓝（evans blue）染色法检测血脑屏障损伤，以免疫印迹法（western blotting）检测血脑屏障紧密连接蛋白occludin和ZO-1的表达。 结果：与control组相比，ADT在给药后45分钟及3小时升高血液H2S的水平，但是NaHS仅在注射45分钟后升高血液H2S的水平。ADT在脑缺血再灌注48小时后显著降低脑梗死体积，其中皮层、纹状体、半球梗死面积分别减少了35.3%、16.9%、33.8%；并降低神经学评分。ADT和NaHS在脑缺血再灌注后48小时后，明显降低伊文思蓝渗透率。Western blotting结果显示ADT可以抑制脑缺血导致的血脑屏障相关蛋白occludin和ZO-1表达量的下降。 结论：硫化氢可以保护脑缺血再灌注后的血脑屏障。 目的：研究硫化氢供体ADT在脑缺血再灌注后保护血脑屏障的机制：是否抑制脑缺血后NF-κB活化导致的炎症因子和NADPH氧化酶（NOX）的诱导表达。 方法：将雄性ICR小鼠随机分为假手术(Sham)组、溶剂对照组（Vehicle，Veh）组和ADT组；24或48小时取缺血侧和非缺血侧脑组织为标本，通过实时定量PCR(QPCR)、酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)试剂盒、NADPH (nicotinamide adeninedinucleotide2'-phosphate reduced tetrasodium salt)氧化酶试剂盒检测脑组织中的多种炎症因子和抑炎因子的表达情况，以及髓过氧化物酶、NADPH氧化酶的活性；利用明胶酶谱（zymography）法，检测脑组织中金属蛋白酶9（matrixmetalloproteinases，MMP-9）的活性；用免疫印迹法（western bloting）检测细胞浆内和细胞核内的NF-κB的表达。 结果：QPCR结果显示，与Sham组相比，Veh组小鼠的缺血皮层组织中促炎因子IL-1β（interleukin-1β）和iNOS (induced nitric oxide synthase)以及NOX2(NADPH oxidase2)和NOX4(NADPH oxidase4)的表达水平明显升高，而以Arg-1(Arginase1)和IL-10为代表的抑炎因子的表达明显降低；与Veh相比，ADT减少IL-1β、iNOS等促炎因子表达，增加Arg-1和IL-10为代表的抑炎因子的表达，并降低NOX4的表达。髓过氧化物酶和NADPH氧化酶试剂盒法显示，与Sham组相比，Veh小鼠的缺血皮层髓过氧化物酶和NADPH氧化酶的活性明显上升；而与Veh相比，ADT减少髓过氧化物酶和NADPH氧化酶的活性。明胶酶谱显示，与Sham组相比，Veh组小鼠的缺血皮层MMP-9的活性上升；与Veh相比，ADT降低脑缺血后MMP-9活性的升高。脑缺血后NF-κB亚单位p65向细胞核的转运是NF-κB活化的标记。Western blotting结果显示：与Sham组相比，Veh组小鼠皮层的细胞核内的NF-κB亚单位p65的水平明显增高，而与Veh相比，ADT可明显减少细胞核内NF-κB亚单位p65的水平；与Sham组相比，Veh组小鼠皮层细胞胞浆内的NF-κB亚单位p65水平降低，而与Veh相比，ADT可明显增加细胞胞浆内的NF-κB亚单位p65的表达水平。这些结果表明ADT抑制脑缺血导致的NF-κB活化。 结论： ADT在小鼠脑缺血再灌注损伤后保护血脑屏障的作用机制可能与抑制NF-κB活化，从而抑制多种炎症因子的表达和NOX介导的ROS(Reactive oxygenspecies)的产生。
[Abstract]:Protective effect of first part of hydrogen sulfide on blood brain barrier after cerebral ischemia / reperfusion injury in mice

Objective : To investigate the protective effect of hydrogen sulfide ( H2S ) on cerebral ischemia - reperfusion injury in mice .

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本文编号：1875326