实验性大鼠脑室出血后铁离子的损伤作用及依达拉奉的干预研究

发布时间：2018-05-24 06:06

  本文选题：脑室出血 + 脑水肿　； 参考：《第三军医大学》2014年硕士论文

【摘要】：第一部分实验性大鼠脑室出血急性期脑损伤特点的研究 背景与目的 脑出血(Intracerebral hemorrhage，ICH)是一类常见的威胁老年人健康的脑血管疾病，病死率高、致残率高、治疗困难，至今，对脑出血产生的神经功能障碍尚无有效的干预策略和治疗手段。脑室出血(Intraventricular hemorrhage，IVH)是ICH的常见一种类型，发生率高达30%～50%，目前多项临床多因素回归分析及前瞻性随机对照研究已证实IVH是ICH预后不良的重要因素。既往对IVH后研究多关注慢性脑积水形成的机制，对IVH急性期脑损伤的特点及相关机制缺乏研究。新近临床试验结果显示尽管早期纤溶治疗及脑室外引流虽能快速清除脑室内积血并且降低脑积水的发生率，但却未能显著降低总体病死率及改善预后。根据上述研究我们推测：IVH后急性期脑损伤可能是其预后不良的重要环节，为此我们通过立体定位侧脑室注射自体动脉血建立IVH大鼠模型，对IVH后急性期脑损伤的病理特点进行了研究。 材料与方法 实验动物采用SD (Sprague Dawley)大鼠，由第三军医大学野战外科研究所实验动物中心提供。44只大鼠随机分为两组：生理盐水组、脑室出血组。脑室出血组采用股动脉取血200ul，立体定位技术向右侧脑室内注入手术建模，生理盐水组按上述方法注入200ul生理盐水。术后24小时Micro-CT及脑标本评价模型可靠性及稳定性，采用干湿质重法测定脑组织含水量、伊文思蓝染色法观察血脑屏障损害情况及术后48小时IgG免疫荧光染色法观察脉络丛IgG表达情况。 结果 1、Micro-CT及大体脑标本可见脑室出血组大鼠脑室内积血铸型、脑室扩张，脑室出血模型稳定可靠。 2、24小时脑室出血组大鼠双侧大脑半球脑组织含水量均明显高于生理盐水组。 3、24小时脑室出血组可见大鼠血脑屏障损伤(伊文思蓝在脑组织中大量渗出)，并且血脑屏障持续开放至48小时(IgG表达48小时表达升高)。 4、7天时，脑室出血组大鼠剥离右侧脑室见大量含铁血黄素沉积脑室壁，提示脑室出血组大鼠存在铁超载。 结论 脑室出血后急性期存在脑室扩张、脑组织水肿、血脑屏障损伤等基本病理特征，7天时存在铁超载，上述基本病理特征及铁超载可能是影响IVH患者预后不良的重要环节。 第二部分实验性大鼠铁离子侧脑室注射后脑损伤及依达拉奉的干预研究 背景与目的 近年来研究证实ICH后存在铁超载，铁在疾病进程中发挥重要角色，我们前期研究已证实IVH后存在铁超载，且铁超载与脑积水的发生密切相关。第一部分研究结果显示IVH后急性期脑损伤存在脑室扩张、脑组织水肿、血脑屏障损伤、铁蓄积等基本病理特点，但铁超载是否在IVH后急性期脑损伤中发挥作用尚不明确。研究显示氧化应激是ICH后铁离子导致脑损伤的重要机制。IVH后脑室内亦存在铁超载，但是否通过氧化应激造成脑损伤尚不清楚。依达拉奉是一种自由基清除剂，已被证实可以减轻氧化应激造成的组织损伤。因而我们通过建立了侧脑室注铁大鼠模型，观察铁离子的脑损伤作用及自由基清除剂依达拉奉是否可以减轻氧化应激并发挥神经功能保护作用。 材料与方法 本实验包括2部分。第一部分将99只大鼠随机平均分为3组：生理盐水组、二氯化铁组、二氯化铁+依达拉奉治疗组。24小时采用干湿质重法测定脑组织水含量、伊文思蓝染色法观察血脑屏障通透性、化学法测定氧化应激标志物丙二醛(MDA)含量及组织中超氧岐化酶(SOD)活力、FLUORO-JADE C免疫荧光染色法及TUNEL免疫组化染色法观察海马神经细胞损伤、透射电镜观察脑室壁纤毛超微病理以及48小时采用IgG免疫荧光染色法观察脉络丛IgG表达，观察给予自由基清除剂依达拉奉(6mg/kg)治疗后上述时间点脑组织含水量、MDA、SOD等各项指标的变化。第二部分将15只大鼠随机分为3组：生理盐水组、三氯化铁组、三氯化铁+依达拉奉治疗组。通过水迷宫定位航行试验(22-27天)及空间探索试验(28天)观察铁离子脑损伤产生的学习记忆障碍，水迷宫后通过剥离大鼠脑室观察脑室壁黄染及通过扫描电镜观察脑室壁纤毛超微病理改变及观察自由基清除剂依达拉奉能否改善大鼠远期学习记忆功能及缓解脑室壁纤毛损伤。 结果 1、二氯化铁侧脑室注射可导致双侧大脑半球脑组织含水量升高，血脑屏障损伤、氧化应激标志物丙二醛含量升高，超氧歧化酶活力降低，海马神经细胞大量变性、凋亡，脑室壁组织水肿、剥脱及纤毛损伤。自由基清除剂依达拉奉可以缓解二氯化铁侧脑室注射导致的双侧大脑半球脑含水量升高，降低氧化产物含量，提高超氧歧化酶活力，减少海马神经细胞损伤，并对脑室壁组织及纤毛发挥保护作用。 2、水迷宫定位航行试验(22-27天)显示各组大鼠游泳潜伏期随训练时间逐渐缩短，生理盐水组潜伏期成绩最好，其次为三氯化铁+依达拉奉治疗组，最后为三氯化铁组；空间探索试验(28天)显示三氯化铁侧脑室注射组大鼠在目标象限花费时间及游泳剧烈最短，穿越平台次数最少，依达拉奉治疗可以提高水迷宫空间探索试验时大鼠在目标象限花费时间、增加在目标象限游泳距离及穿越平台次数。 3、28天三氯化铁组仍可见较多的含铁血黄素沉积，扫描电镜示脑室纤毛局部脱落，表面被覆高电子致密物(含铁血黄素)，自由基清除剂依达拉奉可以减少铁离子在脑室壁蓄积，减少纤毛脱落。 结论 1、铁侧脑室注射可导致脑水肿、血脑屏障损伤、氧化应激产物含量升高、海马神经细胞损伤、脑室壁室管膜细胞损伤及纤毛脱落、大鼠学习记忆障碍等；这些病理特征同IVH急性脑损伤有相同或相似之处。 3、自由基清除剂依达拉奉可以缓解铁离子侧脑室注射导致的急性期脑损伤如脑水肿、血脑屏障损伤、氧化产物含量增高等，也可改善铁离子导致的远期学习记忆功能及减少脑室壁纤毛脱落，示自由基能够通过减轻铁的氧化应激发挥神经保护作用，从而为临床IVH后急性期脑损伤使用自由基清除剂提供实验及理论支持。
[Abstract]:Study on the characteristics of acute cerebral injury in the first part of experimental rat ventricular hemorrhage

Background and Purpose

Cerebral hemorrhage ( ICH ) is a common type of cerebrovascular disease threatening the health of the elderly . The mortality rate is high , the disability rate is high , and the treatment is difficult .

Materials and Methods

Forty - four rats were randomly divided into two groups : physiological saline group and ventricular hemorrhage group .

Results

1 銆，

本文编号：1927968