1.替莫唑胺通过上调p38 MAPK信号通路调控AQP4表达影响胶质瘤细胞生物学行为 2.U251细胞MCT1、4在氧糖
本文选题：胶质瘤 + 水通道蛋白4 ； 参考：《重庆医科大学》2017年硕士论文
【摘要】：目的胶质瘤是最常见、致死率最高的原发性中枢神经系统肿瘤。替莫唑胺(Temozolomide,TMZ)是临床治疗初发和复发恶性胶质瘤的一线用药,但是其具体的抗肿瘤作用具体分子机制却不十分清楚。本文拟探讨替莫唑胺是否通过调节水通道蛋白4的表达(Aquaporin 4,AQP4)以及激活MAPK(mitogen-activated protein kinase)信号通路,进而影响胶质瘤细胞的恶性生物学行为。方法人胶质瘤细胞株U87和U251分别随机分为对照组和TMZ给药组。MTT检测细胞增殖存活能力,流式细胞技术检测细胞周期的分布情况,划痕实验和侵袭实验分别检测细胞迁移和侵袭能力,免疫印迹测定JNK、ERK,AQP4和p38的表达变化。结果MTT实验提示TMZ可抑制U87和U251细胞的增殖和存活能力,流式细胞检测结果提示TMZ导致细胞G2/M期阻滞;免疫印迹结果显示:与对照组相比,TMZ组AQP4的表达下调(P0.05),p-p38/p38的表达上调(P0.05),而p-JNK/JNK和p-ERK/ERK表达无明显变化;划痕实验和侵袭实验提示TMZ能够抑制胶质瘤细胞U87和U251的迁移和侵袭能力,给予p38激动剂(anisomycin)其作用与TMZ相似,而加入p38的抑制剂(SB203580)可以阻断TMZ的作用。结论TMZ通过激活p38 MAPK信号通路,从而降低AQP4的表达,进而抑制胶质瘤细胞的增殖、生长、迁移和侵袭能力。本研究从细胞分子角度阐释了TMZ的抗肿瘤作用,同时为寻求胶质瘤的治疗新靶点提供理论基础。目的观察氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)后,神经胶质瘤细胞U251的乳酸转运和单羧酸转运蛋白(monocarboxylate transporter,MCT)1、4的表达变化,以探讨胶质瘤增殖生长的分子机制。方法将胶质瘤细胞株U251随机分为对照组和模型组(OGD组),模型组的干预时间点分别为1、3、6 h。MTT试剂盒检测细胞增殖生长情况,HE染色观察细胞的形态变化,乳酸试剂盒检测细胞培养液中的乳酸含量,免疫荧光和免疫印迹观察MCT1和MCT4的蛋白表达变化情况。结果与对照组相比,随着氧糖剥夺时间延长,模型组细胞增殖能力下降(P0.05);细胞培养液中的乳酸浓度增高(P0.05);MCT1、4的表达上调,并随氧糖剥夺时间延长其表达逐渐增强(P0.05);细胞培养液中加入MCTs的抑制剂4-CIN后,其乳酸浓度降低(P0.05)。结论U251细胞氧糖剥夺后,随着细胞培养液中乳酸浓度增加,MCT1、4亦表达上调,而细胞的增殖生长能力下降;抑制MCT的表达,细胞培养液中的乳酸浓度降低,提示MCT1、4可能通过参与神经胶质瘤缺血缺氧微环境中乳酸的转运,进而调控细胞的增殖生长过程。
[Abstract]:Objective Glioma is the most common primary central nervous system tumor with the highest mortality. Temozolomide (TMZ) is a first-line drug for the treatment of primary and recurrent malignant gliomas, but the specific molecular mechanism of its antitumor effect is not well understood. The aim of this study is to investigate whether temozolidomide affects the malignant biological behavior of glioma cells by regulating the expression of aquaporin 4 (Aquaporin 4 / AQP4) and activating MAPK (mitogen-activated protein kinase) signaling pathway). Methods Human glioma cell lines U87 and U251 were randomly divided into two groups: control group and TMZ administration group. MTT assay was used to detect cell proliferation and viability. Flow cytometry was used to detect the distribution of cell cycle. The cell migration and invasion ability were detected by scratch assay and invasion assay, and the expression of JNKN ERKN AQP4 and p38 were detected by Western blotting. Results MTT assay showed that TMZ could inhibit the proliferation and survival of U87 and U251 cells, and flow cytometry showed that TMZ caused G2 / M phase arrest of U87 and U251 cells. The results of Western blotting showed that the expression of AQP4 in TMZ group was down-regulated (P0.05) and the expression of p-p38 / p38 was up-regulated (P0.05), while the expression of p-JNK-JNK and p-ERK / ERK was not significantly changed in TMZ group, the scratch test and invasion experiment showed that TMZ could inhibit the migration and invasion of U87 and U251 glioma cells. The effect of p38 agonist (anisomycin) was similar to that of TMZ, but the effect was blocked by adding p38 inhibitor (SB203580). Conclusion TMZ can inhibit the proliferation, growth, migration and invasion of glioma cells by activating the p38 MAPK signaling pathway, thereby reducing the expression of AQP4. The aim of this study is to elucidate the antitumor effect of TMZ from the cellular molecular perspective and to provide a theoretical basis for seeking new targets for the treatment of glioma. Objective to explore the molecular mechanism of glioma proliferation and growth by observing the changes of lactic acid transport and the expression of monocarboxylate transporter 1 / 4 in glioma cell line U251 after oxygen-glucose deprivation. Methods Glioma cell line U251 was randomly divided into control group and model group (OGD group). The intervention time of the model group was 1 3 ~ 6 h. MTT assay kit was used to detect the proliferation and growth of the cells. The morphological changes of the cells were observed by HE staining. The content of lactic acid in cell culture medium, the protein expression of MCT1 and MCT4 were detected by immunofluorescence and Western blotting. Results compared with the control group, with the prolongation of oxygen glucose deprivation time, the proliferation ability of the model group decreased (P0.05), the concentration of lactic acid in the cell culture medium increased (P0.05) and the expression of MCT1O4 was up-regulated. The expression of MCTs increased gradually with the prolongation of oxygen glucose deprivation time (P0.05), and the concentration of lactate decreased after the addition of 4-CIN, a inhibitor of MCTs in cell culture medium (P0.05). Conclusion with the increase of lactic acid concentration in cell culture medium, the expression of MCT1O4 is also up-regulated, while the proliferation and growth ability of U251 cells is decreased after oxygen glucose deprivation, and the concentration of lactic acid in cell culture medium decreases with the inhibition of MCT expression. These results suggest that MCT1O4 may regulate the proliferation and growth of glioma cells by taking part in the transport of lactic acid in hypoxia-ischemia microenvironment.
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R739.41
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，本文编号：2067333
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