小鼠缺血性脑卒中模型构建及应用研究

发布时间：2021-08-13 10:36

目的：缺血性脑卒中动物模型的成功构建受很多因素影响，梗塞变异系数（IVC）是评价缺血性脑卒中动物模型效果的重要指标。实验动物模型脑梗塞病灶的范围过大或过小，可影响实验动物脑梗塞变异系数及死亡率。建立缺血性脑卒中实验动物模型关键就是要降低梗塞变异系数及实验动物死亡率。我们用阻断3根血管的方法（3-VO），以期建立能够降低实验动物脑梗塞变异系数及实验动物死亡率的缺血性脑卒中动物模型，并期望产生可靠的临床前证据，以便对缺血性脑卒中的各种干预措施进行评估。苯甲酸阿格列汀（AGL）是一种高选择性的二肽基肽酶4（DPP-4）抑制剂，用于2型糖尿病的治疗，具有心血管保护作用。我们应用C57BL/6J小鼠建立3-VO的缺血性脑卒中模型，观察阿格列汀对小鼠缺血性脑卒中的影响，观察阿格列汀是否具有神经保护作用。方法：我们使用C57BL/6J雄性小鼠，采取一种新式手术入路，经颞肌筋膜入路显露颧弓，切开颞肌筋膜，向背侧一起牵拉面神经及静脉。去除颧弓并钻骨孔开骨窗，双极电凝永久性阻断大脑中动脉，同时行双侧颈总动脉临时阻断，3-VO总时间为15分钟，来构建小鼠缺血性脑卒中模型。在随后的实验中，我们使用C57BL/6J雄性小鼠，预防性给予阿格列汀后对小鼠行3-VO手术，术后观察急性期及慢性期脑梗死体积及神经功能缺损评分。预防性给予阿格列汀后，观察小鼠局部脑血流量（rCBF）的变化并进行脑源性神经生长因子（BDNF）水平测定。小鼠3-VO术后给予阿格列汀治疗，观察小鼠急性期、慢性期脑梗死体积及神经功能缺损评分。结果：我们成功建立了小鼠3-VO的缺血性脑卒中模型，这种动物模型采取的手术入路可以避免颧弓周围静脉的外伤性出血。通过此动物模型我们可以在小鼠大脑皮层形成可靠的、可重复的缺血半暗带（IP）。此局灶性脑卒中动物模型可使缺血半暗带区的rCBF持续连贯的减少。本动物模型可降低梗塞变异系数，大大降低实验动物死亡率，适于评估神经保护药物在缺血性脑卒中当中的保护作用。生理盐水对照组与3个队列研究中不同剂量阿格列汀溶液组的小鼠的体温、心率、平均动脉压、体重、血糖无显著性差异。阿格列汀对小鼠缺血性脑卒中具有保护作用。结论：我们采取3-VO的方式，构建的新型的缺血性脑卒中动物模型，具有更短的手术操作时间，更低的脑梗塞变异系数值，脑梗塞后死亡率更低。本课题组的3-VO缺血性脑卒中模型可以产生连贯的，大小一致的缺血半暗带。我们可使用本动物模型来探索缺血性脑卒中的治疗与保护。长期预防性给小鼠服用阿格列汀可升高脑中BDNF的水平，并降低大脑受缺血性脑卒中的风险。阿格列汀可能是BDNF的增强因子，对小鼠缺血性脑卒中具有保护作用，未来有可能作为神经保护剂用于阻止或减少初发及复发性缺血性脑损伤。
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R743.3;R-332

文章目录

中文摘要

Abstract

前言

参考文献

第一部分小鼠缺血性脑卒中模型构建

1. 研究背景

2. 实验目的

3. 实验动物选取

4. 实验方法

4.1 材料与试剂

4.2 器械设备

4.3 小鼠局灶性脑缺血的诱导

5. 统计学处理

6. 实验结果

6.1 小鼠脑梗塞体积分析

6.2 小鼠 rCBF 测量

6.3 小鼠术后神经功能缺损评分及术后生存率评估

7. 结论

8. 讨论

9. 参考文献

第二部分神经保护药物对小鼠缺血性脑卒中的干预研究

1. 研究背景

2. 实验目的

3. 实验动物选取

4. 实验方法和步骤

4.1 小鼠缺血性脑卒中的诱导

4.2 小鼠生理参数的监测

4.3 小鼠神经功能缺损的评估

4.4 小鼠脑梗死体积的测量

4.5 小鼠rCBF的测定

4.6 小鼠BDNF水平的测量

5. 统计学处理

6. 结果

7. 结论

8. 讨论

9. 参考文献

文献综述

参考文献

中英文缩略词汇对照

攻读学位期间发表文章、课题及成果情况

致谢

【共引文献】