α-硫辛酸对电点燃致痫大鼠行为及海马p38MAPK表达的影响

发布时间：2018-10-07 18:23

【摘要】：目的：癫痫是神经系统中一种常见的综合征，可发生于各个年龄阶段的人群，流行病学调查显示：全世界大约有5000万癫痫患者，我国的癫痫患病率为3.5‰-4.8‰。癫痫具有反复发作的特点，其病理生理基础是脑部神经元高度同步化异常放电导致正常的生理功能紊乱。短暂的反复发作或者一次持续发作均可导致严重的神经元凋亡,尤其是海马等边缘系统的神经元凋亡更为明显。研究表明，神经元凋亡和神经胶质细胞增多能够促使海马硬化，海马硬化导致癫痫频繁发作甚至形成难治性癫痫。因此，深入研究癫痫发作后神经元凋亡的分子机制，探索新型有效的抗神经元凋亡的药物具有深远的意义。 本实验以杏仁核电点燃的慢性癫痫大鼠模型作为研究对象，以α-硫辛酸（α-lipoic acid,α-LA）作为干预剂。分别检测大鼠点燃前后的后发放阈值（ADT)，达到每个发作等级所需的累积刺激数及累积后发放持续时间(ADD)，应用Western Blot方法检测p38MAPK及p-p38MAPK在海马组织中的表达情况，应用流式细胞分析碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染色技术检测海马神经元凋亡率。从而研究α-LA对杏仁核电点燃癫痫大鼠的行为及海马p38MAPK表达的影响，并初步探讨α-LA对杏仁核电点燃致痫大鼠的脑保护作用及分子机制。 方法：选用雄性健康清洁的Wistar大鼠36只，体重在250-300g之间。随机分为正常对照组:不予以任何处理；α-LA组：每天给予α-LA（40mg/kg）腹腔注射一次；假手术组：杏仁核植入电极后不予以任何处理；电刺激模型组：植入电极后每天给予120%的点燃前ADT刺激一次；电刺激+α-LA低剂量组：植入电极后每天给予α-LA （20mg/kg）腹腔注射30min后以120%的点燃前ADT刺激一次；电刺激+α-LA高剂量组：植入电极后每天给予α-LA （40mg/kg）腹腔注射30min后以120%的点燃前ADT刺激一次，连续刺激15天，每组6只大鼠。依据Racine六级评价标准观察大鼠的行为学表现，记录大鼠每天的发作等级及ADD。造模结束后对大鼠采用断头取脑并快速分离海马组织，用Western Blot方法检测p38MAPK及p-p38MAPK的表达水平，并用流式细胞术PI染色技术检测海马神经元凋亡率。 结果： 1.行为学观察①达到第一次Ⅴ级发作所需的累积电刺激数：与模型组（10.17±0.31）相比，电刺激+α-LA高剂量组（11.50±0.43）明显增多（P0.05）；电刺激+α-LA低剂量组（11.17±0.31）与模型组和电刺激+α-LA高剂量组相比差异无统计学意义（P0.05)。②达到第一次Ⅴ级发作所需的累积ADD：与模型组（235.83±5.00）相比，电刺激+α-LA低剂量组（191.17±5.82）和电刺激+α-LA高剂量组（184.83±7.60）明显缩短（P0.05）；电刺激+α-LA高剂量组与电刺激+α-LA低剂量组相比差异无统计学意义（P0.05）。③点燃前后的ADT：模型组点燃后的ADT（133.33±12.29）较点燃前（273.33±24.59）明显降低（P0.05）；电刺激+α-LA高剂量组点燃后的ADT（200.00±17.13）较点燃前（286.67±22.31）明显降低（P0.05）；电刺激+α-LA低剂量组点燃后ADT（153.33±19.78）较点燃前（280.00±30.55）明显降低（P0.05）。④点燃后ADT：与模型组相比，电刺激+α-LA高剂量组明显增高（P0.05）；电刺激+α-LA低剂量组与模型组和电刺激+α-LA高剂量组相比差异无统计学意义（P0.05）。假手术组、正常对照组、α-LA组大鼠均无癫痫发作。 2.Western Blot检测结果假手术组、正常对照组、α-LA组的海马组织内p-p38MAPK表达水平分别为0.55±0.06、0.62±0.05、0.64±0.05，差异无统计学意义（P0.05）。与电刺激+α-LA低剂量组(2.20±0.04)和电刺激+α-LA高剂量组(1.26±0.93)相比，模型组海马p-p38MAPK表达水平(3.39±0.09)明显增高（P0.05）；与电刺激+α-LA高剂量组相比，电刺激+α-LA低剂量组的海马p-p38MAPK表达水平明显增高（P0.05）；与假手术组、正常对照组、α-LA组相比，模型组、电刺激+α-LA低剂量组、电刺激+α-LA高剂量组的海马p-p38MAPK表达水平明显增高（P0.05）。 3. PI染色结果假手术组、正常对照组、α-LA组的海马神经元凋亡率分别为1.91±0.60、1.72±0.46、1.53±0.37，差异无统计学意义（P0.05）。与电刺激+α-LA低剂量组(11.71±0.52)和电刺激+α-LA高剂量组(8.65±0.38)相比，模型组海马神经元凋亡率（14.83±0.60）明显增高（P0.05）；与电刺激+α-LA高剂量组相比，电刺激+α-LA低剂量组的海马神经元凋亡率明显增高（P0.05）；与假手术组、正常对照组和α-LA组相比，模型组、电刺激+α-LA低剂量组、电刺激+α-LA高剂量组的海马神经元凋亡率明显增高（P0.05）。 结论: 1.本实验采用杏仁核电点燃方法成功建立了慢性癫痫大鼠模型。 2.癫痫发作可导致海马组织中p-p38MAPK表达上调、神经元凋亡数量增加。 3.α-硫辛酸能够降低癫痫发作等级、缩短后发放持续时间、下调海马组织内p-p38MAPK的表达水平、降低神经元凋亡率。从而推测α-硫辛酸可能通过抗凋亡途径来发挥癫痫后的神经保护作用，，进而降低癫痫大鼠对电刺激的敏感性。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R742.1

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本文编号：2255215