丹酚酸B治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的机制研究

发布时间：2018-11-25 20:00

【摘要】：实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)是多发性硬化(MS)的动物模型,是由Th1和Th17细胞介导的一种中枢神经系统自身免疫性炎性脱髓鞘疾病。主要累及青壮年,是造成青壮年神经系统功能性残障的主要因素之一。在中枢神经系统,渗入的自身活化的Th1/Th17(CD4+)细胞,CD8+T细胞,巨噬细胞/树突状细胞,肥大细胞以及活化的小胶质细胞,会产生大量的促炎性细胞因子IFN-γ,IL-17,TNF-α,GM-CSF和IL-23等,促进细胞介导的免疫反应。针对其炎性反应的特点,目前临床上多发硬化的治疗多以抗炎和免疫调节为主。但是,高昂的价格严重制约了我国多发硬化患者对该类药物的使用。目前我国患者主要采取激素治疗的方法,效果不佳且副作用严重。因此,寻找价格低廉、副作用小的免疫抑制和免疫调节药物分子用以我国多发硬化患者的治疗显得尤为迫切。中药在我国有着长久的用药历史,一些药用成分也具有较强的抗炎或免疫调节的活性,是可能的廉价免疫抑制或免疫调节药物的来源。因此,本研究选取具有较强免疫调节的中药单体—丹酚酸B,利用EAE动物模型,研究其对疾病的作用及可能的作用机制,取得的研究结果如下:(1)利用200μg MOG35-55免疫8-12周雌性C57BL/6小鼠,小鼠发病后,每天腹腔注射30 mg/kg的丹酚酸B,以给予腹腔注射同等体积生理盐水的实验组为对照,结果表明腹腔给予丹酚酸B可有效缓解EAE的严重程度,丹酚酸B组的临床评分和发病率均较对照组显著降低,而实验组的体重则明显优于对照组;(2)利用HE免疫组化分析显示,丹酚酸B治疗组中枢神经系统的炎性浸润明显减少。小鼠充分灌注后,利用Percoll密度梯度离心法分离实验组和对照组脊髓中的单个核细胞,计数发现丹酚酸治疗组中枢神经系统含有更少的单个核细胞的浸润。同时脊髓冰冻切片后利用免疫荧光染色分析发现丹酚酸B治疗抑制了中枢神经系统白细胞的浸润;(3)取脊髓冰冻切片,利用GFAP及Iba-1的特异性免疫荧光分析发现,丹酚酸B治疗组GFAP阳性细胞数以及Iba-1阳性细胞数显著减少,表明丹酚酸B治疗减少了EAE小鼠astrogliosis的形成和中枢神经系统中活化的小胶质细胞和巨噬细胞的数量;(4)利用细胞计数和流式细胞仪分析显示丹酚酸B的治疗并没有显著减少脊髓中CD4+T细胞的数量,然而治疗组脾脏中CD4+T细胞的数量相对于对照组显著降低。进一步细胞内染流式分析显示丹酚酸B治疗显著降低了外周淋巴系统中Th1细胞的数量,但对Th17细胞的数量影响不显著;(5)分离免疫后9天的EAE小鼠脾脏中的单个核细胞体外培养,并用20μg/ml的MOG35-55刺激MOG特异性T细胞的增殖,同时培养液中分别加入丹酚酸B和PBS,3天后,流式分析Th1和Th17细胞的所占的比例并收集上清用ELISA分析IFN-γ的释放,结果表明丹酚酸B抑制了MOG特异性Th1细胞的增殖和IFN-γ的释放。(6)体外诱导致炎性Th1和Th17细胞,分别建立Th1和Th17细胞介导的过继免疫EAE动物模型,在细胞移植后持续每天一次给予30 mg/kg的丹酚酸B治疗,结果表明,丹酚酸B特异性的缓解了Th1细胞过继免疫介导的EAE疾病。上述结果表明,中药单体成分丹酚酸B可有效治疗Th1细胞介导的EAE疾病,提示其在MS/EAE的治疗中可能发挥作用,有望基于此开发出价格低廉的多发硬化治疗药物,对我国该类疾病的有效治疗具有重要意义。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R744.51

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本文编号：2357226