苦参素对实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠防治作用的研究

发布时间：2018-11-28 18:59

【摘要】：目的：观察苦参素（MAT）对实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）的防治作用，探讨MAT对EAE大鼠防治作用的机制，为其治疗多发性硬化（MS）寻找理论依据。方法：将6-7周龄、体重180-220g的雌性Wistar实验大鼠50只按每组10只的数量随机分成5组。以豚鼠脊髓匀浆（GPSCH）作为致敏抗原，完全福氏佐剂（CFA）作为抗原佐剂，两者混合后制成致敏剂对随机选出的4组大鼠进行致敏后建立EAE模型，并设为EAE对照组，低、中、高剂量MAT组(MAT-L组、MAT-M组、MAT-H组)，剩余1组为正常对照组。自造模当日起，正常对照组和EAE对照组不做任何处理常规饲养，MAT-L组、MAT-M组、MAT-H组连续15日分别应用MAT胶囊50mg／kg·d、100mg／kg·d、200mg／kg·d剂量灌胃一次。造模后需每日定时观察各组Wistar实验大鼠的临床表现如精神饮食、体重变化、肢体活动等以确定发病潜伏期、进展期，并进行高峰期神经功能障碍评分。未发病的大鼠观察1月后处死，发病的EAE大鼠以连续3天观察神经功能障碍评分未加重，或出现严重共济失调、肢体完全瘫痪、濒死的时间作为实验终止时间。同时在实验终止时留取大鼠外周静脉血、脑组织等保存待检测。通过病理检查、ELISA等检测方法，观察大鼠发病高峰期脑组织炎症病理改变及脑组织匀浆中Th1、Th2、Th17代表性细胞因子浓度变化和静脉血髓鞘碱性蛋白(MBP)浓度、T淋巴细胞亚群（CD4+、CD8+）比例变化。根据EAE和MS的免疫机制选定γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-17(IL-17)分别作为Th1、Th2、Th17代表性细胞因子。通过SPSS17.0软件对数据进行统计学分析。结果：1．大鼠发病情况：(1)临床表现：正常对照组大鼠精神、饮食、睡眠及活动同平时,未见有发病表现。EAE大鼠造模后不同程度出现毛色暗淡、精神差、饮食睡眠下降、活动减少、尾巴无力、肢体瘫痪、大小便失禁，，甚至抽搐死亡等现象。各MAT组大鼠的临床表现较EAE对照组轻，其中以MAT-H组最轻。(2)发病潜伏期：EAE大鼠发病潜伏期时间以EAE对照组最短，为9.30±0.94天；MAT-H组最长，为16.60±0.97天。与EAE对照组相比，各MAT组潜伏期时间延长显著(P0.01)；MAT-L组、MAT-M组、MAT-H组大鼠潜伏期时间依次延长，各MAT组间比较具有统计学差异(P0.01)。(3)疾病进展期：各组EAE大鼠疾病进展期时间以EAE组最长，为7.20±1.14天；MAT-H组最短，为2.90±0.74天。与EAE对照组相比,各MAT组进展期时间显著变短(P0.01)；MAT-L组、MAT-M组、MAT-H组大鼠进展期时间依次缩短，各MAT组间比较具有统计学差异(P0.01)。(4)发病高峰期神经功能障碍评分：疾病高峰期各组EAE大鼠神经功能障碍评分以EAE对照组最高，为3.70±0.95分；MAT-H组最低，为2.00±0.82分。与EAE对照组相比，各MAT组神经功能障碍评分显著下降(P0.01、P0.05)；MAT-L组、MAT-M组、MAT-H组大鼠神经功能障碍评分依次降低，各MAT组间比较具有统计学差异(P0.05)。(5)发病症状严重程度及死亡率：各组EAE大鼠发病症状及死亡率以EAE对照组最高，MAT-H组最低；与EAE对照组相比，各MAT组发病症状及死亡率降低(P0.01、P0.05)。MAT-L组、MAT-M组、MAT-H组大鼠发病症状及死亡率依次降低，各MAT组间比较具有统计学差异(P0.05)。2.中枢神经系统（CNS）病理变化：(1)脑组织病理变化：各组EAE大鼠脑组织均可见数量不等的炎性细胞，对脑组织及血管的浸润程度不同，以EAE对照组最为明显，MAT-H组最轻，正常对照组未见异常。EAE对照组脑组织病理切片改变典型，表现为散在白质炎性脱髓鞘及少突胶质细胞破坏，严重可见轴索结构破坏，呈空泡样缺失。MAT-L组、MAT-M组、MAT-H组大鼠脑组织炎症病理改变程度依次减轻。(2)脑组织炎症病理评分：各组EAE大鼠病理评分以EAE对照组最高，为2.9±0.32分；MAT-H组最低，为1.2±0.63分。与EAE对照组相比，各MAT组病理评分降低明显(P0.01、P0.05)；MAT-L组、MAT-M组、MAT-H组大鼠脑组织炎症病理评分依次降低，各MAT组间比较具有统计学差异(P0.01、P0.05)。3.大鼠脑组织匀浆中细胞因子含量变化：与正常对照组脑组织匀浆中IFN-γ、IL-17浓度及IFN-γ/IL-4值相比，EAE对照组、各MAT组其值显著上升(P0.01)；与EAE对照组相比，各MAT组脑组织匀浆中IFN-γ、IL-17浓度及IFN-γ/IL-4值水平明显下降(P0.01)。MAT-L组、MAT-M组、MAT-H组大鼠脑组织匀浆中IFN-γ、IL-17浓度及IFN-γ/IL-4值依次下降，各MAT组间比较具有统计学差异(P0.01、P0.05)。与正常对照组脑组织匀浆中IL-4浓度相比，EAE对照组、各MAT组其浓度水平下降明显(P0.01)；与EAE组相比，各MAT组脑组织匀浆中IL-4浓度水平明显上升(P0.01)。MAT-L组、MAT-M组、MAT-H组大鼠脑组织匀浆中IL-4浓度依次升高，各MAT组间比较具有统计学差异(P0.01)。4.大鼠静脉血中MBP浓度:与正常对照组静脉血中MBP浓度相比，EAE对照组、各MAT组其浓度水平显著上升(P0.01)；与EAE对照组相比，各MAT组静脉血中MBP浓度水平明显下降(P0.01)。MAT-L组、MAT-M组、MAT-H组大鼠静脉血中MBP浓度依次下降，各MAT组间比较具有统计学差异(P0.01、P0.05)。5.T淋巴细胞亚群（CD4+、CD8+）比例变化：与正常对照组大鼠相比，EAE对照组、各MAT组静脉血中CD4＋、CD8＋淋巴细胞比例降低（P 0.01、P0.05），CD4＋/CD8＋值升高（P0.05）。与EAE对照组相比，各MAT组静脉血中CD4＋、CD8＋淋巴细胞比例升高(P0.01)，CD4＋/CD8＋值降低（P0.01）。与MAT-L组相比，MAT-M组、MAT-H组静脉血中CD4＋、CD8＋淋巴细胞比例升高(P0.01、P0.05），CD4＋/CD8＋值降低（P0.01、P0.05）。与MAT-M组相比，MAT-H组静脉血中CD4＋、CD8＋淋巴细胞比例升高(P0.01、P 0.05），CD4＋/CD8＋值降低（P0.05）。6．大鼠发病高峰期免疫生化指标与临床及病理相关性分析：(1)EAE对照组及各MAT组大鼠脑组织匀浆中IFN-γ水平与发病潜伏期呈负相关，具有统计学差异（P0.01）；与疾病进展期、高峰期神经系统功能受损、脑组织炎症病理改变呈正相关，具有统计学差异（P0.01）。(2)EAE对照组及各MAT组大鼠脑组织匀浆中IL-4水平与发病潜伏期呈正相关，具有统计学差异（P0.01、P0.05）；与疾病进展期、高峰期神经系统功能受损、脑组织炎症病理改变呈负相关，具有统计学差异（P0.01、P0.05）。(3)EAE对照组及各MAT组大鼠脑组织匀浆中IL-17水平与发病潜伏期呈负相关，具有统计学差异（P0.01、P0.05），与疾病进展期、高峰期神经系统功能受损、脑组织炎症病理改变呈正相关，具有统计学差异（P0.01、P0.05）。结论：1.EAE大鼠发病高峰期机体免疫失去平衡，CD4＋、CD8＋淋巴细胞比例下降，两者比值上升；促炎症因子IFN-γ、IL-17分泌增加，抗炎症因子IL-4分泌减少；MBP浓度升高。2.MAT具有减轻EAE大鼠的发病症状程度，使发病潜伏期延长、疾病进展期缩短,降低发病高峰期神经系统功能受损，减轻脑组织炎症细胞的病理损害作用，其影响程度与MAT剂量大小呈正相关。3.MAT防治EAE大鼠机制可能与使CD4＋、CD8＋淋巴细胞比例上升，两者比值下降；降低促炎症因子IFN-γ、IL-17及升高抗炎症因子IL-4的分泌；使Th1细胞表达下降，Th2细胞表达升高,维护Th1/Th2轴平衡等有关，从而发挥对EAE大鼠免疫功能的调节作用，其调节程度与MAT剂量大小呈正相关。
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【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R744.3

【参考文献】