CD133抗体标记磁性纳米粒子介导热疗对胶质瘤干细胞的影响

发布时间：2019-05-12 19:41

【摘要】：目的： 探讨CD133抗体标记的磁性纳米粒子(Fe304)介导的热疗对胶质瘤干细胞的作用效果,并初步探讨其可能相关的作用机制,为胶质瘤的临床治疗提供新的思路和方法,使治疗效果得到改善。 方法： 1.使用添加神经生长因子的无血清培养基在37℃,5%CO2条件下培养U251胶质瘤干细胞,并进行随机分组：将GSCs分为非磁场组与磁场组,然后每组再分别分为Control(无添加剂)、Fe304(添加纳米粒子25μg/ml)、CD133+Fe3O4(添加抗体标记的纳米粒子25μg/ml)3组。 2.按照实验分组分别处理各组细胞后,进行MTT检测,分别于0h、24h、48h,72h、96h在490mim测定吸光度,记录并绘制细胞生长曲线,计算细胞抑制率,并根据最大抑制率确定最佳作用时间。 3.根据MTT结果确定的最佳处理时间点对分组处理后的各组细胞行台盼蓝染色,进行细胞计数,并根据公式：细胞死亡率染蓝细胞数/总细胞数,计算各组细胞的死亡率。 4.为检测细胞周期变化及凋亡情况,选取MTT最佳作用时间之前的时间点(抑制效果明显但细胞死亡率较低时),分别处理各组细胞进行以下检测：采用PI染色法流式细胞技术检测各组中GSCs的细胞周期变化情况；分组处理后收集各组细胞,进行Tunel染色检测细胞凋亡情况。 5.选择与上述相同时间点分别处理各组细胞,检测细胞凋亡相关因子的变化：采用免疫组化方法检测经分组处理后各组细胞FAS、BCL-2表达的变化；通过Western Blot检测经分组处理后各组细胞FAS、BCL-2蛋白水平的变化情况；通过荧光定量PCR检测经分组处理后各组细胞FAS、BCL-2基因水平的变化情况。 结果： 1.MTT结果显示,与其他各组相比,磁场组中Fe304组与CD133+Fe3O4组的细胞生长在24h后开始受到抑制,以72h抑制最为明显且细胞出现明显死亡,两组的抑制率分别达16%和36%,以CD133+Fe3O4组更为明显(P0.05)。 2.根据MTT结果选择最佳作用时间点72h对各组细胞进行台盼蓝拒染实验,结果显示,磁场组细胞死亡率明显高于非磁场组(P0.01),且磁场组中Fe304组与CD133+Fe3O4组细胞死亡率分别达68%和81%,以CD133+Fe3O4组最为明显(P0.05)。 3.分组处理各组细胞后48h进行PI染色流式细胞术,结果显示,磁场组中Fe304组与CD133+Fe3O4组的细胞呈现出明显凋亡峰,分别为4.42%与7.67%；Tunel染色结果显示磁场组中Fe304组与CD133+Fe3O4组内可见大量呈棕色的凋亡细胞核,而其他组内棕色反应不明显。 4.各组细胞经分组处理后48h行免疫组化检测,结果显示,非磁场组中各组FAS和BCL-2的表达与对照组相比变化不明显,而磁场组中Fe304组与CD133+Fe3O4组的FAS表达较对照组增多,BCL-2表达较对照组降低。 5. Western blot结果显示,细胞经处理48h后,磁场组中Fe304组与CD133+Fe3O4组FAS蛋白的相对表达量较其他组明显增多,分别达β-actin的5.19倍和5.97倍；BCL-2蛋白的相对表达量较对其他组明显降低,分别为β-actin的0.38倍和0.20倍,均以CD133+Fe3O4组变化最明显(P0.05)。 6.荧光定量PCR结果显示,细胞经处理48h后,磁场组中Fe304组与CD133+Fe3O4组FAS基因的相对表达量较其他组明显增多,分别达对照组的2.87倍和3.34倍；BCL-2基因的相对表达量较对其他组明显降低,分别为对照组的0.55倍和0.23倍,均以CD133+Fe3O4组变化最为明显(P0.05)。 结论：CD133是脑肿瘤干细胞的重要标记物,通过CD133抗体标记磁性纳米粒子能有效实现靶向治疗。磁性热疗能有效抑制胶质瘤干细胞的生长,其作用机制可能涉及诱导细胞凋亡。FAS和BCL-2均参与了热疗过程中的细胞凋亡调节。使用CD133抗体标记的磁性纳米粒子介导热疗,能明显抑制胶质瘤干细胞的生长,且作用较单纯磁性热疗更为显著。
[Abstract]:Purpose: To investigate the effect of magnetic nanoparticles (Fe304) mediated by CD133 antibody on glioma stem cells, and to explore the possible mechanisms of action, to provide a new way of thinking and method for the clinical treatment of glioma, and to change the therapeutic effect. Good. Methods:1. U251 glioma stem cells were cultured at 37 鈩，

本文编号：2475650