【摘要】：目的：通过制备大鼠大脑中动脉阻塞(Middle cerebral artery occlusion, MCAO)线栓模型,探讨无创性肢体远隔缺血后适应(Remote ischemic postconditioning,RPC)对大鼠急性期脑缺血损伤是否具有保护作用。并进一步探讨RPC对大鼠脑缺血再灌注损伤后近期及远期神经功能恢复影响及TLR4-MyD88信号转导通路在RPC中的作用机制。为脑梗死的特异性治疗提供新的思路。 方法：本实验分三步进行,第一部分,建立稳定的大鼠MCAO线栓模型,证明无创性远隔缺血后适应对缺血脑组织的保护作用。90只健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠(250g-300g),随机分为5组,每组18只：(1)假手术组(sham组);(2)缺血2h再灌注组(ischemic reperfusion,I/R组)；(3)缺血原位后适应组(ischemic postconditioning,IP组)；(4)缺血即刻后适应组(remote ischemic postconditioning at beginning of ischemic, I-RPC组)；(5)再灌注即刻后适应组(remote ischemic postconditioning at beginning of reperfusion, R-RPC组)。各组大鼠分别于再灌注后24h进行神经功能缺损评分,采用TUNEL法测凋亡细胞、干湿称重法测脑含水量、TTC染色拍照、Image-ProPlus软件分析,计算脑梗死体积,IHE染色光镜观察形态学。第二部分,通过建立稳定的大鼠MCA02h线栓模型,探讨反复远隔缺血后适应对大鼠脑缺血15天内神经功能恢复情况的影响。将成年健康雄性SD大鼠90只,随机分为3组,每组30只,各组大鼠根据时间不同(1d、3d、6d、10d、15d)各分为5个亚组,每亚组6只：(1)假手术组(sham组)；(2)缺血2h再灌注组(I／R组)；(3)远隔缺血后适应组(RPC组)。于相应天数时间点(1d、3d、6d、10d、15d)行无创性RPC完毕后6h进行神经功能评分,神经功能评分完毕后处死大鼠,采用TUNEL法对海马细胞进行凋亡检测,免疫组化法检测hs-CRP。第三部分,在证实远隔缺血后适应脑保护作用的基础上,探讨其可能机制。72只健康雄性SD大鼠(体重250g-300g)随机分为缺血再灌注组(I/R组,n=24)；远隔缺血后适应组(RPC组,n=24)；假手术组(sham组,n=24)。各组分为12h、24h、48h、72h4个时间点组(n=6)。HE染色观察海马病理学变化；使用免疫组织化学染色和免疫印迹法检测海马区TLR4蛋白的表达,原位杂交法测定海马区TLR4mRNA的表达。免疫组织化学染色测定海马区MyD88、NF-κB、hs-CRP、IL-6的表达。 结果： (1)与对照组相比,IP组、I-IPC组、R-RPC组大鼠凋亡细胞水平、脑水肿程度、脑梗死体积、再灌注24h神经系统评分、病理改变程度均明显降低,具有统计学差异(p0.05)；但IP组、I-IPC组、R-RPC组3组之间两两对比无显著性差异(P0.05)。 (2)I/R组与RPC组评分高于Sham组,差异有统计学意义(P0.05); RPC组各时间点NSS评分较工/R组低,差异有统计学意义(P0.05)； (3)HE染色Sham组大鼠海马结构清晰,神经元形态正常,排列整齐、层次分明；I／R组大鼠海马结构松散,神经元缺失明显,可见较多神经元胞体缩小、核固缩深染,也有胞体肿胀、胞浆内形成空泡的神经元以及小片状坏死区域；RPC组神经元缺失、细胞肿胀较I/R组明显减轻,细胞形态趋于改善。 (4) Sham组海马区各时间点TLR4蛋白、TLR4mRNA、MyD88和NF-κB表达水平均较低。I/R组与RPC组水平较Sham组明显增高(P0.05)。RPC组TLR4蛋白、TLR4mRNA和MyD88、NF-κ B阳性表达在各时间点均低于I/R组(P0.05)。 (5) Sham组海马区各时间点hs-CRP和IL-6仅有少量表达,I/R组与RPC组hs-CRP和IL-6表达较Sham组明显增高(P0.05), RPC组hs-CRP和IL-6阳性表达在各时间点均低于I/R组(P0.05)。 结论：无创性肢体远隔缺血后适应同大脑原位缺血后适应一样可以减少大鼠急性缺血脑梗死体积,减轻脑水肿,能够改善大鼠脑缺血15天内神经功能缺损程度,对大鼠急性脑缺血具有神经保护作用,其机制可能与下调TLR4-MyD88信号转导通路、抑制炎症细胞因子释放有关。
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【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R743.3
【参考文献】
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2496453
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