低氧预适应对老年人骨髓间充质干细胞体外培养作用的研究

发布时间：2019-08-14 21:13

【摘要】：目的：低氧预适应骨髓间充质干细胞可以提高其移植后在靶组织的存活率。人骨髓间充质干细胞移植治疗缺血性脑卒中很大程度上是通过分泌一些因子促进血管生成和神经再生，但其机制尚未完全明确。本文的主要目的是探讨低氧预适应对老年人骨髓间充质干细胞体外培养作用的影响，为其用于缺血性脑卒中治疗临床研究提供依据。 方法：采用全骨髓细胞贴壁法分离、培养50～70岁健康供者的骨髓间充质干细胞。倒置相差显微镜观察细胞的形态学变化特征及增殖生长情况，取第3代细胞用于实验。用流式细胞仪检测人骨髓间充质干细胞表面标志物CD90、CD105、CD73和NBG。低氧环境构建为94%N2、1%O2、5%CO2的三气恒温细胞培养箱。用胰酶细胞消化液（0.25%Trypsin-EDTA)消化后的第3代细胞以1×106/ml的密度接种到培养瓶，置于94%N2、1%O2、5%CO2的三气恒温培养箱内培养48h，以常氧（21%O2）培养作为对照。用Western blot法检测细胞HIF-1α、VEGF、CXCR4、TLR4和NF-κB蛋白表达。ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF浓度。细胞免疫组化法检测ki67表达阳性细胞率。 结果：体外分离、培养的老年人骨髓间充质干细胞呈成纤维细胞样梭形外观，培养10～12天达80%融合，集落成旋涡状。细胞表面抗原高表达CD90、CD105和CD73，而NBG表达阴性。低氧预适应增强人骨髓间充质干细胞HIF-1α、VEGF、CXCR4、TLR4和NF-κB蛋白表达（P0.05）。ELISA法检测结果显示，与对照组相比，低氧预适应组人骨髓间充质干细胞培养上清液中VEGF浓度增高（P0.05）。低氧预适应组与对照组均能检测出ki67表达阳性细胞，阳性细胞数统计学无显著差异（P0.05）。 结论：低氧预适应可增强老年人骨髓间充质干细胞HIF-1α、VEGF、CXCR4、TLR4和NF-κB蛋白表达和分泌VEGF。提示低氧预适应可增强老年人自体骨髓间充质干细胞治疗脑缺血效果。
【图文】：

图 1 老年人 BMSCs 原代培养（4 天，200×）Figure1 Aged human BMSCs growth in primary culture (4 d，200×）

图 1 老年人 BMSCs 原代培养（4 天，200×）Figure1 Aged human BMSCs growth in primary culture (4 d，，200×）
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R743.3

【共引文献】

相关期刊论文 前10条

1 邢昕;吕蓉;李素萍;刘忠;;体外分离培养人源性脂肪间充质干细胞及其鉴定[J];中国输血杂志;2013年08期

2 李陈;肖玉周;;不同来源的间充质干细胞生物学特性差异研究进展[J];创伤外科杂志;2014年01期

3 于祥茹;韩晓谦;袁浩天;董志恒;程梁;吴哲;;PLGA/CPC支架材料复合骨髓基质干细胞构建组织工程骨的体外效果评价[J];吉林大学学报(医学版);2014年02期

4 刘苹;史春梦;胡玲莉;张波;王正国;;脂肪源性干细胞无酶分离培养方法的研究[J];重庆医学;2014年10期

5 陈聪聪;程迅生;;骨髓间充质干细胞基因治疗骨缺损的研究进展[J];安徽医学;2014年04期

6 王荣;邓运涛;陈强;;人脐带间充质干细胞分泌肝细胞生长因子的初步研究[J];中国输血杂志;2014年08期

7 陈林;张坤;董伟;杨珂;艾辉;陈禄华;;脐带间充质干细胞无血清和含胎牛血清培养体系比较[J];重庆理工大学学报(自然科学);2014年09期

8 王露;翟玮玮;杨向荣;王芳;李见;张强;李玉云;;慢病毒介导RNA干扰沉默Fas基因在脐带间充质干细胞中的表达[J];南方医科大学学报;2014年10期

9 许薇薇;黄一飞;;人脂肪组织来源干细胞眼科基础研究应用现状[J];解放军医学院学报;2013年09期

10 何宏亮;李建国;高志良;;人工肝和干细胞在肝衰竭治疗中的进展[J];临床肝胆病杂志;2013年09期

相关会议论文 前1条

1 张可华;袁宝珠;;治疗性干细胞产品相关的风险因素[A];2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周论文集[C];2012年

相关博士学位论文 前10条

1 朱天琦;GDNF和NT-3双基因诱导BMSCs分化为神经样细胞的实验研究[D];华中科技大学;2013年

2 苟丽娟;人骨髓间充质干细胞诱导分化为软骨细胞过程中microRNA作用机制研究[D];北京协和医学院;2013年

3 陈书连;1、骨髓间充质干细胞对小鼠异基因骨髓移植后aGVHD的作用研究 2、成人急性淋巴细胞白血病自体移植的临床研究及相关预后因素[D];北京协和医学院;2013年

4 关剑;胰腺癌间充质干细胞样肿瘤相关纤维母细胞功能研究及维甲酸对肿瘤相关纤维母细胞抑制性研究[D];北京协和医学院;2013年

5 杨舟鑫;CD106是具有强免疫调节功能的胎盘绒毛膜间充质干细胞的标志[D];北京协和医学院;2013年

6 付苏;脂肪来源基质血管成分细胞与脂肪颗粒共移植后的生物学转归[D];北京协和医学院;2013年

7 王有为;脐带间充质干细胞临床前安全性研究[D];北京协和医学院;2013年

8 李阳;人脂肪间充质干细胞向雪旺细胞的诱导分化及对外周面神经损伤修复的实验研究[D];北京协和医学院;2013年

9 丁晓霜;骨髓基质干细胞治疗局部脑缺血作用机制研究[D];北京协和医学院;2013年

10 及月茹;人脐带间充质干细胞促进B细胞增殖和终末分化[D];北京协和医学院;2013年

相关硕士学位论文 前10条

1 曲戈;IL-24基因修饰的间充质干细胞向肺癌靶向迁移的体外研究[D];郑州大学;2013年

2 徐扬阳;重组人碱性成纤维细胞生长因子对脂肪干细胞分化的影响[D];郑州大学;2013年

3 杨颖珂;骨髓间充质干细胞移植对脑出血大鼠血肿周围凋亡及P75NTR、TrkA表达的影响[D];郑州大学;2013年

4 左彬;SD大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）体外培养方法改良[D];郑州大学;2013年

5 马云鹏;应用大块平铺法对人脐带间充质干细胞分离、传代、冻存及复苏的研究[D];河北医科大学;2013年

6 刘方方;大鼠口腔黏膜上皮细胞诱导骨髓间充质干细胞向上皮细胞分化的体外研究[D];河北医科大学;2013年

7 王学良;乳腺癌MDA-MB-231细胞中CD105~+/CD90~+细胞群的特性研究[D];河北医科大学;2013年

8 马欣;模拟肝脏组织微环境对人脐带间充质干细胞向肝细胞样细胞分化的影响[D];河北医科大学;2013年

9 李涵;富勒烯衍生物调控肿瘤微环境中成纤维细胞功能的初步研究[D];河北医科大学;2013年

10 吴卓;定向诱导间充质干细胞向心肌细胞方向分化过程中Nkx2.5的表达[D];广西医科大学;2013年

本文编号：2526803