硫化氢对脑缺血再灌注损伤的保护作用研究

发布时间：2019-09-09 06:18

【摘要】：目的： 本实验拟研究硫化氢对脑缺血再灌注损伤的保护作用及其与细胞自噬的关系，从而揭示其可能的作用机制。 方法： 实验分为正常对照组（Control组）、HR组、HR+10μM H2S组、HR+30μM H2S组，HR+60μM H2S组，HR+30μM H2S+LY294002（PI3K抑制剂）组。模拟体内脑组织缺血再灌注损伤过程，分别对离体SH-SY5Y细胞和MACO法大鼠缺血再灌注模型脑组织进行研究： 1、应用光学显微镜观察各组SH-SY5Y细胞形态的变化； 2、通过MTT法检测各组SH-SY5Y细胞OD值，比较细胞存活率； 3、通过TTC染色比较大鼠脑组织梗死面积大小； 4、应用Western Blot技术检测各组细胞自噬特异性标记蛋白Beclin1、LC3B以及AKt蛋白表达水平的变化； 结果： 1、与Control组相比， HR组的SH-SY5Y细胞密度明显稀疏（P0.05)。加入不同浓度H2S预处理后的SH-SY5Y细胞密度增加，细胞存活率在一定范围内与H2S剂量呈现剂量依赖性增加（P＜0.05），其中以60μM H2S的保护作用最明显，与HR组相比，差异具有显著统计学意义（P均0.05)；LY294002干预后30μM H2S组细胞密度减少，细胞存活率降低，与30μM H2S组相比，差异具有显著统计学意义（P0.05)； 2、与Control组相比，HR组大鼠脑组织呈现明显的脑梗死（P＜0.05），加入不同浓度H2S预处理后的大鼠脑组织梗死面积较小（P＜0.05），梗死率在一定范围内与H2S剂量呈现剂量依赖性减小，其中以60μM H2S的保护作用最明显，与HR组相比，差异具有显著统计学意义（P均0.05)；LY294002干预后30μM H2S组大鼠脑组织梗死面积增大，梗死率升高，与30μM H2S组相比，差异具有显著统计学意义（P0.05)； 3、在离体SH-SY5Y细胞和在体大鼠脑组织中，与Control组相比，HR组Beclin1表达水平均升高（P＜0.05），加入不同浓度H2S预处理后Beclin1表达水平减低（P＜0.05），在一定范围内与H2S剂量呈现剂量依赖性减小，其中以60μM H2S的作用最明显，与HR组相比，差异具有显著统计学意义（P均0.05)；LY294002干预后30μM H2S组Beclin1表达水平升高，与30μM H2S组相比，差异具有显著统计学意义（P0.05)； 4、在离体SH-SY5Y细胞和在体大鼠脑组织中，与Control组相比，HR组LC3B表达水平均升高（P＜0.05），加入不同浓度H2S预处理后LC3B表达水平减低（P＜0.05），在一定范围内与H2S剂量呈现剂量依赖性减小，其中以60μM H2S的作用最明显，与HR组相比，差异具有显著统计学意义（P均0.05)；LY294002干预后30μM H2S组LC3B表达水平升高，与30μM H2S组相比，差异具有显著统计学意义（P0.05)； 5、在离体SH-SY5Y细胞和在体大鼠脑组织中，，与Control组相比，HR组Akt蛋白表达水平没有显著差别（P＞0.05），加入不同浓度H2S预处理后Akt蛋白表达水平升高（P＜0.05），在一定范围内与H2S剂量呈现剂量依赖性升高，其中以60μM H2S的作用最明显，与HR组相比，差异具有显著统计学意义（P均0.05)；LY294002干预后30μM H2S组Akt蛋白表达水平降低，与30μM H2S组相比，差异具有显著统计学意义（P0.05)。 结论： 1、外源性H2S能够在离体水平和在体水平减轻脑缺血再灌注损伤，并且在一定范围内呈现浓度依赖性。 2、外源性H2S通过抑制细胞自噬减轻脑缺血再灌注损伤。 3、推测外源性H2S脑缺血再灌注损伤保护机制可能是通过PI3K/Akt信号通路抑制细胞自噬作用来实现的。
【图文】：

蛋白免疫印迹（Western Blot） 实验原理estern blot是通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，使待测蛋白按分子量大小分离成条带。通过一系列步骤，利用特异，最终使目的蛋白显影。 实验步骤取蛋白样品1）细胞蛋白提取）吸去培养细胞的培养皿中的培养液，用干净的细胞刮养皿底刮下，4℃预冷的 PBS（pH7.4）冲洗转移到 10

、不同浓度 H2S 对 SH-SY5Y 细胞的作用研究实验结果表明，如果设定正常细胞的存活率为 1，HR 组细胞明显稀疏，存活率为 0.594，与正常对照组相比，具有显著统计义（P＜0.05），加入不同浓度的 H2S 后各组细胞密度均增加， HR+10μM H2S 组细胞存活率为 0.687，HR+30μM H2S 组细胞存为 0.882，HR+60μM H2S 组细胞存活率为 0.932。不同浓度 H2S与正常对照组相比均具有显著统计学意义（P＜0.05）；与 HR比均具有显著统计学意义（P＜0.05）。同时，HR+30μM H2S 组R+60μM H2S 组与 HR+10μM H2S 组相比，具有显著统计学意义0.05），HR+60μM H2S 组与 HR+30μM H2S 组相比，具有显著统意义（P＜0.05）。见图 4.1-4.2 和表 4.1。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R743.3

【参考文献】

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本文编号：2533421