单链抗体融合人血清白蛋白的制备及对重症肌无力患者血清的抑制作用

发布时间：2019-09-26 23:38

【摘要】：重症肌无力(myasthenia gravis, MG)是累及神经肌肉接头处的某些成分而导致突触后膜信号传导障碍的一种自身免疫病,以反复出现的肌肉收缩无力,用力时恶化,休息后缓解为特征。在80%～85%的MG患者中,其主要的靶抗原是肌肉的乙酰胆碱受体(muscle acetylcholine receptor, AChR)。单链抗体(single-chain fragment variable, scFv)是由免疫球蛋白的重链可变区(variable region of heavy chain, VH)和轻链可变区(variable region of light chain, VL)经一条柔软可弯曲的肽链连接而成。scFv完整的保留了抗原结合的能力,由于它没有抗体的Fc段,因此不能激活补体。然而,scFv小分子的生理特点决定了它可以从体内经肾脏快速清除。scFv637是MG抗原特异性scFv,由人AChR a亚单位上67～76位氨基酸(即主要免疫原区,main immunogenic region, MIR)组成。它可以结合MG患者血清中的抗MIR的自身抗体,从而保护人AChR,这使它有可能成为一种MG特异性免疫抑制治疗剂。与scFv一样,scFv637具有快速从血液中清除的缺点。因此,在本项研究中,我们将scFv637基因与半寿期较长的人血浆白蛋白(human serum albumin, HSA)基因连接,以延长scFv637的半寿期,增加其在血中的稳定性。这使得scFv有可能成为MG的一种特异性免疫抑制剂。 目的：制备单链抗体融合人血清白蛋白,以延长单链抗体的半寿期并增加其在血中的稳定性,为重症肌无力的免疫治疗奠定基础。 方法：将scFv637与HSA基因连接后转入毕赤酵母菌(Pichia pastoris)中表达出融合蛋白scFv637-HSA。经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白质印迹试验确定其分子量；通过免疫荧光试验检测融合蛋白scFv637-HSA与人肋间肌AChR的结合情况；经竞争性ELISA检测融合蛋白抑制MG患者血清中的自身抗体与AChR的结合能力,以及融合蛋白在健康血清中的稳定性。 结果：融合蛋白在毕赤酵母菌中成功表达,其分子量约为89kD；免疫荧光试验结果显示,融合蛋白可以与人肋间肌神经肌肉接头处的AChR结合；经12例MG患者血清检测发现,融合蛋白对AChR的抑制率为2%～77.4%；融合蛋白在静态健康血清中可以维持大约3天。 结论：成功制备出scFv-HSA融合蛋白,并且其保留了保护AChR的能力。这使得scFv-HSA融合蛋白有望成为一种特异性免疫抑制治疗MG的手段。
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R746.1

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 李保华,徐沙贝,徐金枝,张苏明;血清阴性重症肌无力发病机制的研究进展[J];国外医学.神经病学神经外科学分册;2000年01期

2 黄建平;重症肌无力误诊32例分析[J];河南实用神经疾病杂志;2000年04期

3 郭丹,范宇,于明坚;血浆置换疗法治疗重症肌无力1例报告[J];锦州医学院学报;2000年01期

4 王炜,南振鸿,凌振芬,管红兵,吕传真;干扰素-γ对重症肌无力患者自身抗体的调节作用及相关性分析[J];中国神经免疫学和神经病学杂志;2000年04期

5 陈向军,吕传真;干扰素-α及其在重症肌无力治疗中的应用(综述)[J];中国神经免疫学和神经病学杂志;2000年04期

6 何国胜,徐金枝,唐冰杉,杨明山;挛生子重症肌无力[J];卒中与神经疾病;2000年04期

7 王铁栓,张清勇,张斌,刘全喜,曾涟乾;重症肌无力的外科治疗(附56例报道)[J];河南外科学杂志;2000年02期

8 王磊,陈景寒;重症肌无力的诊断与外科治疗[J];山东医药;2001年02期

9 舒志荣;重症肌无力[J];山东医药;2001年11期

10 殷宪岑;中西医结合治疗重症肌无力28例[J];山东中医杂志;2001年04期

相关会议论文 前10条

1 杨明山;;重症肌无力的治疗进展[A];第三届全国中西医结合神经系统疾病学术会议论文集[C];2000年

2 王桂平;李柱一;刘睿;王者晋;;实验性自身免疫性重症肌无力被动免疫模型的建立与评测[A];中华医学会第七次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2004年

3 李海峰;;重症肌无力患者维生素D受体多态性的初步研究[A];中华医学会第七次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2004年

4 闫彬彬;杨硕;徐欣;王曙辰;王丹丹;金连弘;李呼伦;;早期重症肌无力发病机理的实验研究[A];中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会论文摘要汇编[C];2005年

5 尹厚民;冯蔚;;重症肌无力的针电极肌电图研究[A];2006年浙江省神经病学学术年会论文汇编[C];2006年

6 刘卫彬;门丽娜;何雪桃;夏强;黄如训;;我国南方1520例重症肌无力患者的临床特点[A];第九次全国神经病学学术大会论文汇编[C];2006年

7 刘卫彬;门丽娜;何雪桃;夏强;黄如训;;重症肌无力患者免疫指标检测及其临床评价[A];第九次全国神经病学学术大会论文汇编[C];2006年

8 侯丽珍;徐文;韩德民;张丽;景筠;;重症肌无力的咽喉部临床表现特点[A];中华医学会第十次全国耳鼻咽喉-头颈外科学术会议论文汇编（上）[C];2007年

9 王炳旭;丛志强;;重症肌无力患者血清可溶性白细胞介素-2受体的研究[A];职工医院医学理论与实践[C];1998年

10 张茂文;张西蒙;张天宏;;对重症肌无力的认识和治疗[A];2011中国针灸学会年会论文集（摘要）[C];2011年

相关重要报纸文章 前10条

1 浙江省中医院神经内科副主任中医师 张丽萍;从虚论治重症肌无力[N];健康报;2013年

2 张哲浩;我国独创“三孔”式手术成功救治重症肌无力患者[N];光明日报;2014年

3 何钱 贵州省江口县人民医院;一味洋虫治愈重症肌无力[N];中国中医药报;2014年

4 青岛大学医学院附属医院神经内科博士 李海峰;重症肌无力治疗时请注意[N];健康报;2001年

5 杨平;重症肌无力研究取得重大进展[N];科技日报;2004年

6 吉仁;治疗重症肌无力再获成功[N];中国劳动保障报;2004年

7 本报记者　 周丽;重症肌无力没那么可怕[N];河北日报;2006年

8 王振岭 杨叁平 李宗海;双向免疫有效调节治疗重症肌无力[N];健康报;2006年

9 主任医师 王小衡;重症肌无力是怎么回事[N];卫生与生活报;2007年

10 王振岭 杨叁平 李宗海;中药治疗重症肌无力机制被揭示[N];中国医药报;2006年

相关博士学位论文 前10条

1 刘爱东;补体变化和重症肌无力病情的关系[D];第四军医大学;2009年

2 杨燕;重症肌无力的多基因多位点单核苷酸多态性分析[D];天津医科大学;2010年

3 杨丽;全血灌流免疫吸附治疗重症肌无力的实验研究[D];天津医科大学;2002年

4 李衍滨;益筋方治疗重症肌无力的实验研究[D];山东中医药大学;2006年

5 朱丽君;重症肌无力动物模型的建立及中药治疗重症肌无力的机制研究[D];吉林大学;2011年

6 于靓霞;间充质干细胞输注治疗重症肌无力的实验研究[D];北京协和医学院;2011年

7 张星虎;重症肌无力患者外周血单个核细胞糖皮质激素受体的研究[D];中国协和医科大学;2000年

8 饶媛;基于数据挖掘技术的重症肌无力疾病五脏相关性研究[D];广州中医药大学;2010年

9 李翔;重症肌无力患者外周血调节性T细胞及相关可溶性因子在其发病机制中的研究[D];复旦大学;2007年

10 胡任飞;重症肌无力病例回顾分析及健脾祛湿方对肌细胞损伤作用的实验研究[D];广州中医药大学;2009年

相关硕士学位论文 前10条

1 吴军城;重症肌无力中西结合内科治疗方案优化[D];广州中医药大学;2012年

2 许胜杰;补益脾肾治疗ⅡB型重症肌无力的疗效观察[D];广州中医药大学;2010年

3 王良光;升降散加减治疗重症肌无力的临床疗效观察[D];北京中医药大学;2010年

4 汪双双;中药紫河车提取制剂辅助治疗重症肌无力的疗效观察[D];广州中医药大学;2011年

5 高展;胸腺切除与重症肌无力远期预后多因素分析及相关机制探讨[D];浙江大学;2002年

6 王晓辉;胸腺五肽对重症肌无力的药效研究[D];天津大学;2006年

7 吕秋实;重症肌无力中医证候的回顾性调查、分析[D];广州中医药大学;2008年

8 王其进;中医重症肌无力患者报告结局量表反应度考核[D];广州中医药大学;2008年

9 幸波;电视胸腔镜手术治疗重症肌无力患者的临床疗效评价[D];汕头大学;2011年

10 顾晓宇;张静生教授治疗Ⅰ、Ⅱ型重症肌无力的临床经验总结[D];辽宁中医药大学;2012年

，

本文编号：2542369