下调Pygo2对U251及U251起源的胶质瘤干细胞生物学特性的影响

发布时间：2019-10-13 17:21

【摘要】：目的:构建Pygo2 RNAi慢病毒载体干扰Pygo2表达,研究其对人胶质母细胞瘤U251增殖与凋亡的影响及机制,初步探索Pygo2 si RNA对U251起源的胶质瘤干细胞瘤球大小与数目的影响。方法:构建Pygo2基因sh RNA的慢病毒表达载体,感染人胶质母细胞瘤U251,荧光显微镜检测转染效率。采用RT-PCR检测Pygo2、CD133、Nestin、Sox2、C-myc基因m RNA表达,Western blot检测Pygo2、H3K4me2、H3K4me3蛋白表达,MTS、流式细胞仪分别检测U251增殖和凋亡,悬浮培养法培养及检测瘤球的大小与数目。结果:荧光显微镜显示慢病毒转染U251细胞,其效率高达80%以上,RT-PCR、Western blot结果提示Pygo2基因及蛋白表达均下降,H3K4me3蛋白的表达随着Pygo2的下调而降低。同阴性对照组相比,Pygo2 si RNA干扰组细胞增殖速率减慢,凋亡比率增加。RT-PCR结果显示肿瘤干细胞标志物如CD133、Nestin、Sox2,Wnt信号通路下游靶基因C-myc的表达在干扰组中比阴性对照组低。悬浮培养法培养胶质瘤肿瘤干细胞,发现其Pygo2的m RNA表达水平高于贴壁培养法培养的细胞。在Pygo2 si RNA干扰组中,形成的瘤球大小和数目较对照组明显减小、减少。结论:1、以慢病毒为载体介导转染细胞,其转染效率与干扰效率均较高。2、Pygo2 si RNA通过降低H3K4三甲基化从而抑制U251细胞增殖、促进U251细胞凋亡。3、Pygo2可影响U251起源的胶质瘤干细胞的增殖,其机制有待进一步探究。
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.4

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本文编号：2548786