M2型小胶质细胞通过释放exosomes发挥促血管生成作用的研究

发布时间：2019-11-30 21:18

【摘要】：缺血性脑中风是危害全球人类健康的重要疾病之一。其发病率一直居高不下,而目前对于脑中风治疗手段有限,急需寻求新的改善脑中风的方法。在脑中风发生的急性期,小胶质细胞作为重要的固有免疫细胞,能够迅速活化,引起一系列的炎症反应。随着中风的发展,脑内微环境的改变,小胶质细胞可被微环境中的某些因子刺激分化为不同的表型,课题组前期研究发现在体外将小胶质细胞极化为M2型后回输至中风小鼠脑内能够明显减小脑中风损伤区的梗死面积,提示M2型小胶质细胞能够作为改善脑中风的一种策略,但其具体机制尚不明确,有待于进一步的研究。因此本研究通过3D培养技术将M2型小胶质细胞与HUVEC血管内皮细胞进行混合培养,检测血管生成情况,并分析其可能的机制是否是通过分泌exosomes发挥作用。基于以上的背景,我们从以下几方面进行了研究:1、将小胶质细胞系BV2分别极化为M1型和M2型,并鉴定了表型;2、为了研究不同表型的小胶质细胞的促血管生成作用,我们通过BV2细胞与内皮细胞HUVEC进行3D共培养以及鸡胚绒毛尿囊膜实验,均观察到M2型BV2具有较强的促血管生成能力。3、为了研究M2型BV2发挥促血管生成作用的机制,我们分离了不同表型BV2细胞培养上清中的外泌体(exosomes)并将其直接与内皮细胞HUVEC进行3D共培养,发现M2型BV2来源的exosomes能够更好的促进血管生成。4、为了进一步揭示exosomes发挥促血管作用的具体机制,我们用基因芯片的方法检测了不同表型BV2细胞释放的exosomes内micro RNA的表达差异,发现mi RNA-26a差异较明显,且有报道其与血管生成相关,那么M2型BV2细胞很有可能是通过此mi RNA来实现促血管生成的。我们通过以上实验揭示了M2型小胶质细胞可以促进血管生成,并且这种作用是通过释放exosomes实现的,而exosomes中的mi RNA-26a可能是其发挥促血管生成作用的一个关键机制之一。本研究为改善中风提供了新的可能和新的方法。
【图文】：

小胶质细胞,共聚焦显微镜,细胞

第一部分小胶质细胞的极化及其表型的鉴定2 结果2.1 LPS 极化 BV2 为 M1 型，IL-4 极化 BV2 为 M2 型的基因水平检测为了得到 M2 型的小胶质细胞 BV2 进行后续实验，实验室分别采用 LPS 诱导 M1 型 BV2 细胞（对照组），，用 IL-4 诱导 M2 型 BV2 细胞（实验组），于诱导48 h 提取细胞的 RNA 进行基因检测。采用 PCR 的方法检测巨噬细胞 M1 型表面标志 TNF-α 和 iNOS；M2 型表面标志 Arg-1 和 TGF-β 的基因水平表达，结果如图 1 所示：

血管生成

BV2极化后血管生成相关基因的表达检测A)ELISA检测BV2极化后上清中VEGF的表达;日)R丁一户CR检测BV2极化后血管生成相关基因VEGF,HGF,FGF.EGF,PGF.PDGF,MMP-2.MMP一的表达
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R743.3

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