TM对大鼠SAH模型脑血管损害作用的实验研究

发布时间：2020-01-30 02:09

【摘要】：目的：研究小脑延髓池注入凝血酶(Thrombin, TM)对大鼠脑血管的损害作用及与基底动脉痉挛的关系；并探讨脑脊液中TM对大鼠蛛网膜下腔出血(Subarachnoid hemorrhage, SAH)模型及非SAH模型脑血管的损害是否存在差异。 方法：(1)采用通过小脑延髓池注入TM的方法将一定剂量的外源性TM注入大鼠蛛网膜下腔,采用“小脑延髓池二次注血法”制作大鼠SAH模型,大鼠(全血+TM)模型的制作方法是在第一次注血时将中等剂量(3U)的TM通过小脑延髓池注射而形成。(2)实验动物分组：采用随机数字表法将健康清洁级大鼠分为A1(对照)组、A2(单纯TM)组和A3(全血+TM)组三个组。①在A1(对照)组中的实验动物均行假手术,通过大鼠小脑延髓池注入相应剂量的生理盐水形成假手术对照组；②在A2(单纯TM)组中通过小脑延髓池向大鼠蛛网膜下腔单纯注入凝血酶3U；③在A3组中的实验动物为SAH模型,并在第一次注血时向蛛网膜下腔注入凝血酶3U。(3)手术成功后,根据实验设计在术后第3天进行灌注处死大鼠,取脑基底动脉标本行病理组织学检查,并运用计算机专业数码图像分析软件Image-Pro Plus (IPP)6.0测量各组大鼠脑基底动脉内腔横截面积,以小脑上动脉下0.2mm处为断端,小脑前下动脉起点上下断端以及基底动脉与椎动脉交点处上断端4点取材血管横截面制作病理切片；再者,各组标本行免疫组化后检测基底动脉壁蛋白酶激活受体-1(Proteinase-activated Receptor-1, PAR-1)和肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α, TNF-α)的表达水平,以PAR-1和TNF-α平均光密度值为半定量指标做统计学分析。 结果：①单纯注射凝血酶(TM)组(A2)与对照组(A1)比较,大鼠基底动脉内腔横截面积较小,差异性显著(P0.05),基底动脉PAR-1和TNF-α的平均光密度值较A1组高,有显著性差异(P0.05)；②同等剂量TM,在SAH模型(A3组)中,基底动脉内腔横截面积较非SAH模型(A2组)小,有显著性差异(P0.05),但基底动脉TNF-α平均光密度值却较A2组低,有显著性差异(P0.05),基底动脉PAR-1平均光密度值无显著性差异(P=0.420.05)。 结论：①TM注入大鼠蛛网膜下腔后基底动脉内腔横截面积缩小,免疫组化检测显示基底动脉壁凝血酶受体PAR-1和炎性因子TNF-α的表达水平增高,提示脑脊液中存在TM有致CVS和脑血管损害作用；②SAH模型与非SAH模型比较,相同剂量TM注入蛛网膜下腔后,基底动脉内腔横截面积、PAR-1表达水平和TNF-α的表达水平差异性不全显著,提示无论是否存在SAH, TM均可导致脑血管痉挛发生。 目的：研究大鼠SAH模型脑脊液中TM存在于蛛网膜下腔的时间与其对脑血管的损害程度的相关性；探讨大鼠SAH模型脑脊液中TM与脑血管痉挛(Cerebral vasospasm, CVS)程度之间的量效关系。 方法：(1)采用“小脑延髓池二次注血法”制作大鼠SAH模型,并在第一次注血时将不同研究剂量的TM注入大鼠蛛网膜下腔,形成(全血+TM)模型。(2)实验动物分组：采用随机数字法将符合实验要求的大鼠分为B1组(3天)和B2组(7天)两个实验组。所有实验动物按照方法(1)制作SAH模型, B1组和B2组分别各设四个小组：①全血,②全血+TM(1U),③全血+TM(3U),④全血+TM(5U)。(3)手术成功后,根据实验设计分别在第3天或第7天灌注处死大鼠,取脑基底动脉标本行病理组织学检查,运用计算机专业数码图像分析软件Image-Pro Plus (IPP)6.0测量各组大鼠脑基底动脉内腔横截面积；然后各组标本进行免疫组化检测大鼠脑基底动脉壁PAR-1和TNF-α的平均光密度值。 结果：(1)全血+TM(3U)3d组(B1.③)和全血+TM(3U)7d组(B2.③)比较,7d组(B2.③)基底动脉横截面积较小,差异有统计学意义(P=0.0030.05), B2.③组的PAR-1和TNF-α平均光密度值增高,差异有统计学意义(P=0.0430.05,P=0.0040.05);(2)全血+TM3d组(B1)组内四组间比较：随TM浓度增高,基底动脉横截面积逐渐缩小、PAR-1和TNF-α平均光密度值逐渐增高,总体组间差异具有统计学意义(P0.05),进一步行两两比较,上述三个指标的差异均具有统计学意义(P0.05);(3)全血+TM7d组(B2)组内四组间比较：四组间在基底动脉内腔横截面积、PAR-1平均光密度值及TNF-α平均光密度值三个指标上的比较不全相同,有显著性差异(P0.05),进一步行两两比较,组间差异均具有统计学意义(P0.05)。 结论：①在大鼠SAH模型中,随着TM存在于蛛网膜下腔的时间延长,CVS程度呈加重趋势；②在大鼠SAH模型中,存在于脑脊液中的TM剂量越大,CVS程度越重,两者呈正相关。
【图文】：

手术24小时后，大鼠神经功能障碍情况会有所改善，枝循环较丰富有关["]。织形态学变化型脑标本肉眼可见，，大量血凝块弥漫性分布于蛛网膜s环周围及环池为主。各组实验动物于设定时间点以固定组织，取材脑及基底动脉组织石

本文编号：2574561