CHI3L1抑制巨噬细胞胞葬对动脉粥样斑块稳定性的影响及机制

发布时间：2020-03-21 04:37

【摘要】：一、研究目的以脑卒中为代表的心脑血管疾病已成为威胁我国居民健康的首要疾病,其中颈动脉狭窄不稳定斑块的脱落是导致脑卒中的重要病因。斑块内部坏死核心与纤维帽动态平衡是影响动脉粥样斑块稳定性的决定性因素。胞葬作用是吞噬细胞清除程序性死亡细胞的生理过程。在动脉粥样斑块中,巨噬细胞胞葬作用的清除能力可直接影响斑块内坏死核心的大小,胞葬作用水平下降将导致动脉粥样斑块稳定性降低。壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)是一种与缺血性脑卒中高度相关的分子标记物,本课题组的前期研究发现发现CHI3L1在颈动脉狭窄患者血清中升高,且可能与斑块不稳定性相关,目前关于CHI3L1对动脉粥样斑块稳定性的影响及其可能的作用机制尚无报道。了解CHI3L1对动脉粥样斑块稳定性的影响,将有助于脑卒中高危患者的早期诊断及早期治疗。因此本课题主要进行的研究为明确CHI3L1对动脉粥样斑块的影响并探究其具体的作用机制。二、研究方法本课题拟在体内临床样本、体外细胞及动物模型水平明确CHI3L1中对患者动脉粥样斑块的影响。首先明确颈动脉狭窄患者的斑块样本CHI3L1内的表达和分布,同时分离培养人及小鼠的原代巨噬细胞,研究CHI3L1在体外对巨噬细胞胞葬作用的影响。随后利用CHI3L1及其中和抗体干预已构建的颈动脉不稳定斑块小鼠模型,明确CHI3L1在体内对巨噬细胞胞葬作用及斑块稳定性的影响。并利用蛋白质组学和生物信息学技术筛选CHI3L1下游的靶基因,并探究其调控的具体分子机制。三、研究结果我们通过临床样本的组织切片分析及RNA检测,明确CHI3L1在不稳定动脉粥样硬化斑块中表达水平较高,且主要分布在斑块坏死核心附近。提取小鼠骨髓巨噬细胞及人外周血巨噬细胞后,通过流式细胞术及激光共聚焦显微镜证明CHI3L1可抑制巨噬细胞的胞葬作用。在构建的颈动脉不稳定斑块小鼠模型中,注射CHI3L1的小鼠与对照组相比,胞葬作用减弱且斑块较不稳定,而予中和抗体注射的小鼠较对照组,胞葬作用较强且斑块较稳定。通过分析临床样本及蛋白质组学技术,筛选出CHI3L1影响胞葬作用的靶基因MFGE8,并通过细胞实验进行了验证。通过回补MFGE8后观察巨噬细胞胞葬作用变化,证实CHI3L1是通过抑制MFGE8表达而抑制巨噬细胞胞葬作用。四、研究结论本课题证实CHI3L1可降低动脉粥样斑块的稳定性。同时本课题通过原代巨噬细胞的体外实验及构建不稳定动脉粥样斑块模型小鼠,明确CHI3L1通过下调胞葬桥接分子MFGE8的表达抑制巨噬细胞的胞葬作用,进而导致粥样斑块坏死核心增大引起斑块稳定性降低。
【图文】：

图 1.1 第一行图片为无症状性染色，图 1.1 中斑块标本来自行颈动脉内膜斑块切除术的认的研究标准，症状性患者的颈动脉斑块的标准为患者最近 180 天内发生过颈动脉狭窄侧的缺血性脑血管症状（脑卒中或短暂性脑缺血发作）[4,36,37]。我们将颈动脉内膜斑块切除术取得的斑块标本包埋后切片，连续的冰冻切片分别进行CD68 及 DAPI 染色。通过大的坏死核心和较薄的纤维帽，这意味着斑块较容易破裂进而脱落。而将斑块内部坏死核心的边缘部分放大后，我们可以发现在不稳定斑块的坏死核心边缘，达较多，且其分布区域与人巨噬细胞标记这表明CHI3L1在症状性患者的症状性患者斑块，第二行图片为症状性患者斑块。由左至右依次为：CHI3L1 染色，CD68 染色及荧光叠加结果。斑块标本来自行颈动脉内膜斑块切除术的颈动脉狭窄患者。认的研究标准，症状性患者的颈动脉斑块通常为不稳定性斑块，而症状性颈动脉狭窄切片分别进行 HE 染色及免疫荧光染色，免疫荧光染色内容为HE 染色染色我们可以发现，不稳定斑块较稳定性具有较CD68 的分布基本一致（白色箭头所指处）。患者的动脉粥样斑块中高表达，且可能影响巨噬细胞的功能。HE颈动脉狭窄患者。根据目前公症状性颈动脉狭窄荧光染色内容为 CHI3L1、CHI3L1 表动脉粥样斑块中高表达，且可能影响巨噬细胞的功能。

图 1.2 第一行图片为稳定性斑块，，第二行图片为不稳定性斑块DAPI、图1.2中不稳定性斑块切片来自手术建立不稳定斑块模型的动脉粥样硬化模式小鼠（LDL-/-C57）颈动脉斑块标本，稳定性斑块切片来自未手术的普通动脉粥样硬化模式小鼠（LDL-/-C57）颈动脉标本。手术造模的主要原理是通过线圈套扎的方法是小鼠颈动脉出现两处局部性缩窄，导致局部血流动力学的改变，进而引起斑块稳定性的下降[43]。通过对这些斑块冰冻切片免疫荧光染色的对比我们发现，未手术组的小鼠颈动脉仅在动脉壁周围有少量斑块附着，手术造模组的小鼠颈动脉管腔内有明显的粥样斑块形成，且以巨噬细胞（红色）及非细胞坏死物质为主要成分的坏死核心占据了粥样斑块的大部分区域，提示斑块处于不稳定状态，表明手术造模成功建立定斑块模型。而 CHI3L1 （绿色）在不稳定斑块中表达量较高，其分布区域与鼠巨噬细胞标记 Mac3 的高度重合（如白色箭头所指
【学位授予单位】：中国人民解放军海军军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R743.3

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 付威;姜英;王婷玉;张赫;董佳琦;万朋;;巨噬细胞极化与肿瘤的研究进展[J];吉林医药学院学报;2019年02期

2 廖成水;毛福超;程相朝;;巨噬细胞极化在微生物感染中的作用研究进展[J];中国预防兽医学报;2019年03期

3 徐晓伟;魏建超;刘珂;邵东华;李蓓蓓;曹瑞兵;陈溥言;马志永;胡敬东;邱亚峰;;不同激活状态的巨噬细胞对流行性乙型脑炎病毒感染的影响[J];中国动物传染病学报;2019年02期

4 邢士刚;;巨噬细胞在慢性阻塞性肺疾病发病机制中的作用研究[J];中国实用医药;2019年12期

5 程相朝;毛福超;;巨噬细胞极化形成的影响因素研究进展[J];动物医学进展;2019年06期

6 巢汝;黄靓;屈顺林;张弛;;巨噬细胞能量代谢与动脉粥样硬化[J];生命的化学;2018年03期

7 崔凡;穰真;王有为;杨戈;;AIDS患者巨噬细胞对白念珠菌的吞噬和灭活功能研究[J];中国麻风皮肤病杂志;2017年04期

8 孟董超;王东;宋娟;卢彦珍;;巨噬细胞极化在冠状动脉粥样硬化发生发展中的作用研究进展[J];长治医学院学报;2017年02期

9 李雪岩;杨玉玉;陈君;;中药抗巨噬细胞泡沫化的研究进展[J];药学与临床研究;2017年05期

10 袁锋;尚茹茹;张锦;温婷;李爱萍;刘晓红;;巨噬细胞极化与动脉粥样硬化[J];中华临床医师杂志(电子版);2015年22期

相关会议论文 前10条

1 杨华;刘海鹏;陈建霞;黄晓辰;郑瑞娟;刘忠华;戈宝学;;GPR160调控分枝杆菌入侵宿主巨噬细胞的机制研究（英文）[A];中华医学会结核病学分会2016年全国结核病学术大会论文汇编[C];2016年

2 姚芳苡;黄自坤;傅颖媛;;人巨噬细胞极化相关长链非编码RNA表达谱筛选及研究[A];第十二届全国免疫学学术大会摘要汇编[C];2017年

3 李枋;霏李杰;;扶正解毒方对共培养体系下肿瘤相关巨噬细胞表型变化影响的实验研究[A];第一届青年中西医结合肿瘤学术论坛论文集[C];2015年

4 白力;张文兰;窦晶莉;王永福;;组蛋白修饰与巨噬细胞极化的关系[A];第十届全国免疫学学术大会汇编[C];2015年

5 史玉玲;王又明;丰美福;;巨噬细胞激活作用的研究[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年

6 程相朝;毛福超;廖成水;;巨噬细胞极化形成的影响因素研究进展[A];中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十三次全国学术研讨会论文集[C];2018年

7 曾娇;;巨噬细胞极化对炎症性疾病的影响[A];第十三届全国免疫学学术大会摘要汇编[C];2018年

8 李小鹏;张伦理;;巨噬细胞极化现象与结核病的关系[A];中华医学会2014全国微生物学与免疫学学术年会论文汇编[C];2014年

9 蒋小丽;姚宇迪;刘卓琦;朱伟锋;罗达亚;;乳腺肿瘤细胞源性外泌体诱导巨噬细胞极化的研究[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会联盟2019年学术与教学交流会摘要集[C];2019年

10 陈罗泉;万晓朋;韩泉;王青青;;白细胞介素27在巨噬细胞抗病毒天然免疫应答中的作用研究[A];浙江省免疫学会第十次学术大会论文集[C];2016年

相关重要报纸文章 前10条

1 主持人 王建新;巨噬细胞的多面人生[N];医药经济报;2015年

2 通讯员 李静 记者 胡德荣;恶性肿瘤巨噬细胞未必皆“恶人”[N];健康报;2014年

3 张化;新技术有望延长血小板保存期[N];中国医药报;2003年

4 张化;半乳糖可延长血小板保存期[N];中国医药报;2003年

5 兰克;以尝试用巨噬细胞治瘫痪[N];科技日报;2000年

6 通讯员 张愉悦 记者 程守勤;巨噬细胞内含炎症“刹车”蛋白[N];健康报;2020年

7 记者 张家伟;巨噬细胞水平影响血压高低[N];健康报;2019年

8 ;癌细胞能通过“别吃我”信号逃避巨噬细胞[N];中国科学报;2019年

9 记者 房琳琳;“别吃我”! 癌细胞还有第二种方式对巨噬细胞这样说[N];科技日报;2017年

10 本报记者 张晔 通讯员 蔡心轶 张翰文;肥胖伤肝？原来是巨噬细胞在作怪[N];科技日报;2016年

相关博士学位论文 前10条

1 丁玲;Nrf2调控小鼠代谢稳态和炎症因子分泌的多重功能及机制研究[D];华中科技大学;2019年

2 张永红;PD-1/PD-L1信号通路调控巨噬细胞分化和功能在早期妊娠中的作用及机制研究[D];华中科技大学;2019年

3 刘娜;乳酸抑制肿瘤巨噬细胞ATP6V0d2表达进而促进HIF-2α介导的肿瘤进展[D];华中科技大学;2019年

4 王志超;不同亚型巨噬细胞在伴鼻息肉的慢性鼻-鼻窦炎中的分布及功能[D];华中科技大学;2019年

5 陶然;Fgl2通过调节巨噬细胞表型促进肝纤维化进展[D];华中科技大学;2019年

6 张静怡;罗非鱼胶原蛋白与生物组织相互作用关系的研究[D];上海海洋大学;2019年

7 何超;β2GPI/抗β2GPI抗体复合物在巨噬细胞脂质积累和粘着斑激酶活化中的作用与机制研究[D];江苏大学;2019年

8 朱艳吉;IL-17A与巨噬细胞极化对实验性眼新生血管形成的影响及机制研究[D];上海交通大学;2016年

9 孙芳芳;RIOK3调控巨噬细胞功能及肿瘤浸润转移的相关机制研究[D];浙江大学;2019年

10 赵西宝;MEF2C调控巨噬细胞M1极化及Th1细胞反应的研究[D];浙江大学;2019年

相关硕士学位论文 前10条

1 张锋;酸敏感离子通道（ASIC1a）在M2型巨噬细胞极化中的作用研究[D];华中科技大学;2019年

2 陈杨梦凡;二氧化钛纳米管载银纳米颗粒通过调节巨噬细胞自噬和活性氧清除促进成骨免疫反应的研究[D];华中科技大学;2019年

3 颜雯茜;光控释放非分泌型TNFα的智能型巨噬细胞联合光热效应用于肿瘤靶向治疗的研究[D];华中科技大学;2019年

4 高佳序;黄连素对β-羟丁酸引起的牛巨噬细胞的氧化应激以及炎症反应的影响[D];吉林农业大学;2019年

5 董文竹;甲硝唑对于巨噬细胞胞内结核分枝杆菌抑菌作用研究[D];内蒙古医科大学;2019年

6 曾庆坛;miR-199a-3p对动脉粥样硬化单核—巨噬细胞转化及炎症反应的作用及机制研究[D];上海交通大学;2016年

7 曹玉凤;20-Hydroxy-3-oxolupan-28-oic acid抗炎活性及其作用机制研究[D];江苏大学;2019年

8 朱玉贞;IL-16通过促进M1型巨噬细胞的极化加重葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠炎症性肠病[D];青岛大学;2019年

9 张燕;色素上皮衍生因子抑制氧化低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞炎症反应[D];中国人民解放军医学院;2019年

10 宋金杨;miR-181a在ox-LDL刺激的人类THP-1源性巨噬细胞中对NLRP3炎症通路调节作用的研究[D];青岛大学;2019年

本文编号：2592767