杨梅黄酮抑制人脑胶质瘤迁移、侵袭和血管生成的机制研究

发布时间：2020-05-07 18:52

【摘要】：脑胶质瘤是中枢神经系统中最常见的恶性肿瘤,临床中主要以手术治疗为主,放疗和化疗为辅的治疗方法,这些方法虽然能够起到一定的作用,但是治疗不久后易复发,有毒副作用,患者的生活质量下降,所以探索有效的且毒副作用小的药物成为了治疗脑胶质瘤的重点。杨梅黄酮(Myricetin)是一种天然的黄酮类化合物,主要存在于日常果蔬、茶、红酒等中。有研究已经表明,Myricetin具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用,并且在体内外能够对皮肤癌、结肠癌等发挥其抗肿瘤作用。但是,Myricetin在人脑胶质瘤中的作用及其机制尚不清楚,因此本课题组研究Myricetin对人脑胶质瘤的抗肿瘤作用及机制。本实验首先通过体外实验用CCK-8实验、transwell实验、划痕实验和HUVEC成管实验分别检测Myricetin对人脑胶质瘤细胞活性、侵袭、迁移和HUVEC成管能力的影响;其次用western blot实验检测Myricetin对MMP-2、MMP-9、MMP-14、MMP-26、HIF-1α和VEGF蛋白的影响,最后使用人脑胶质瘤细胞U87MG,皮下接种于雄性裸鼠的背部,构建模型研究Myricetin在体内对人脑胶质瘤生长的影响。一、Myricetin对人脑胶质瘤细胞活性的影响用CCK-8法检测不同浓度的Myricetin对人脑胶质瘤细胞U87MG作用24h后对其活性的影响。结果显示,随着Myricetin浓度的升高,细胞活性的抑制作用增强,当浓度增大到80μM时,与对照组相比,Myricetin对人脑胶质瘤细胞活性的抑制作用具有统计学意义(P0.05)。结果说明Myricetin能够抑制人脑胶质瘤细胞的活性并呈浓度依赖。二、Myricetin对人脑胶质瘤细胞迁移、侵袭和血管生成的影响1、用划痕实验检测不同浓度的Myricetin对人脑胶质瘤细胞作用24h后对其迁移能力的影响。结果显示,随着Myricetin浓度的升高,人脑胶质瘤细胞的迁移能力减弱,与对照组相比有统计学意义(P0.05)。2、用Transwell小室实验检测不同浓度的Myricetin对人脑胶质瘤细胞作用24h后对其侵袭能力的影响。结果显示,随着Myricetin浓度的升高,穿过基质胶进入下室的细胞数量逐渐减少,与对照组相比有统计学意义(P0.05)。3、通过HUVEC在Matrigel上成管实验检测Myricetin对HUVEC成管能力的影响。结果显示,随着Myricetin浓度的升高,Myricetin能够抑制HUVEC成管,与对照组相比有统计学意义(P0.05)。4、用western blot方法检测MMP-2、MMP-9、MMP-14、MMP-26、HIF-1α、VEGF蛋白的表达量。结果显示,随着Myricetin浓度的升高,MMP-2、MMP-9、MMP-14、MMP-26、HIF-1α、VEGF蛋白在人脑胶质瘤细胞的表达量降低,与对照组相比有统计学意义(P0.05)。三、Myricetin对人脑胶质瘤生长的影响将裸鼠分为5组:溶剂对照组、替莫唑胺阳性对照组、20mg/kg Myricetin组、40mg/kg Myricetin组、20mg/kg Myricetin与替莫唑胺联合用药组。接种后第10天荷瘤形成,采取腹腔注射连续给药的方式,给药10天,剂量为200μl/只,每天监测裸鼠的体重和肿瘤的体积。结果显示,给药结束后与对照组对比,实验组的肿瘤重量和体积有统计学意义(P0.05);联合给药组相对于单独应用20mg/kg Myricetin组有统计学意义(P0.05);通过免疫组化实验检测血管内皮标记物CD31在各组中的表达,溶剂对照组组织内CD31表达较多,其它四组CD31的阳性表达均有不同程度的减少,结果表明与溶剂对照组相比,其它四组肿瘤组织内MVD有所下降,以上结果表明Myricetin能够抑制肿瘤血管的生成,与对照组对比有统计学意义(P0.05)。通过以上结果,我们可以得出以下结论,Myricetin在体外抑制人脑胶质瘤细胞的迁移、侵袭和HUVEC的成管;Myricetin在体内抑制人脑胶质瘤的生长。
【图文】：

3.1.1 CCK-8 实验检测不同浓度的 Myricetin 对人脑胶质瘤细胞活的抑制作用利用 CCK-8 实验检测用不同浓度梯度(0μM、10μM、20μM、40μM、80μ160μM、320μM)的 Myricetin 对人脑胶质瘤 U87MG 细胞处理 24h 后的作用，后用 CCK-8 试剂盒检测各组的细胞活性。如图 3.1 所示，结果表明经 Myric处理24h后的U87MG细胞，细胞活性随着药物浓度的升高而被抑制地更加明显当浓度为 80μM 时，与对照组(0μM)相比，其抑制作用具有统计学意义（P<0.0以上结果表明，，随着 Myricetin 浓度的升高，对细胞活性的抑制作用呈浓度依性。为了探究 Myricetin 对人脑胶质瘤细胞 U87MG 的迁移和侵袭能力，我们用与对照组相比，对细胞活性抑制作用没有统计学意义的细胞浓度做接下来的验研究。

第 3 章 结果ricetin 抑制人脑胶质瘤细胞的迁移和侵袭yricetin 对人脑胶质瘤 U87MG 细胞迁移的作用划痕实验检测不同浓度梯度(0μM、10μM、20μM、40μM)的质瘤 U87MG 细胞处理 24h 后的作用。如图 3.2 所示，U87Mn 作用 24h 后，随着浓度的升高，迁移速率减慢，与对照组(0μ意义（P<0.05）。以上结果表明，随着 Myricetin 浓度的升高7MG 细胞的迁移能力。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.41

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本文编号：2653401