用siRNA脂质体行Survivin和VEGF双把点基因下调可增强U251细胞凋亡

发布时间：2017-03-25 17:00

  本文关键词：用siRNA脂质体行Survivin和VEGF双把点基因下调可增强U251细胞凋亡，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 探讨以survivin和VEGF为双靶点的siRNA转染对神经胶质瘤U251细胞的体外效应。方法分别合成针对survivin和VEGF的siRNA。培养胶质瘤U251细胞,用脂质体包裹survivin-siRNA和/或VEGF-siRNA并转染至U251细胞。实验共分5组：S组：转染survivin-siRNA,V组：转染VEGF-siRNA,SV组转染：survivin-siRNA+VEGF-siRNA,NC组：阴性对照(Negative Control,NC)转染无关序列-siRNA,BC组：空白对照(Blank Control,BC)转染空白脂质体。用荧光实时定量PCR和Western Blot分别检测转染后survivin及VEGF在mRNA及蛋白水平的表达。用CCK-8及流式细胞术分别检测U251细胞增殖和凋亡。结果1.通过荧光实时定量PCR和Western Blot检测结果显示：在转染siRNA48h后,S组和SV组的survivin mRNA和蛋白的表达均显著下调,与NC组、BC组比较有显著性差异(P0.01),但两组之间无明显差别;S组,V组和SV组的VEGF mRNA和蛋白的表达均下调,但V组和SV组与S组相比在mRNA水平上有差异(P0.05)。2.CCK-8检测：与NC组、BC组相比,S组、V组、SV组在转染24h、48h、72h后细胞增殖能力均显著降低(P0.01),S组、SV组与V组相比具有统计学差异(P0.05),且在转染后72h,双靶点组(SV组)与单靶点组(S组、V组)相比具有显著性差异(P0.01)。3.流式细胞术检测结果显示：与NC组、BC组相比,在转染48h后,S组、V组、SV组细胞凋亡增加(P0.01),且SV组与S组、V组相比变化明显(P0.01)。结论1.用脂质体包裹的siRNA转染可下调U251细胞survivin及VEGFmRNA及其蛋白表达,使U251细胞增殖抑制,凋亡增加。2survivin及VEGF的双靶点基因下调可增强其效应。3.通过siRNA下调survivin基因,可下调VEGF mRNA及蛋白的表达,反之则否,考虑survivin可能为VEGF的上游靶点。
【关键词】：U251细胞 siRNA survivin VEGF
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 缩略词表6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-13
• 1. 实验材料13-15
• 1.1 实验细胞13
• 1.2 实验主要材料及仪器13
• 1.3 实验主要试剂及配制方法13-15
• 2 实验方法15-22
• 2.1 siRNA序列设计及合成15-16
• 2.2 细胞复苏及培养16
• 2.3 实验分组16
• 2.4 siRNA转染16-18
• 2.5 荧光实时定量PCR检测sur和VEGF mRNA表达18-20
• 2.6 Western Blot检测sur和VEGF蛋白表达20-21
• 2.7 CCK-8实验检测细胞增殖变化21
• 2.8 流式细胞术检测细胞凋亡变化21-22
• 2.9 统计学分析22
• 3. 实验结果22-28
• 3.1 Cy3-scrambled-siRNA转染及转染效率22
• 3.2 荧光实时定量PCR检测sur和VEGF mRNA的表达结果22-23
• 3.3 Western Blot检测sur和VEGF蛋白表达结果23-25
• 3.4 CCK-8检测细胞增殖能力结果25-26
• 3.5 流式细胞术检测细胞凋亡结果26-28
• 4. 讨论28-31
• 5. 结论31
• 6. 参考文献31-33
• 综述：Survivin和VEGF在脑胶质瘤中的研究进展33-46
• 参考文献41-46
• 攻读学位期间发表文章情况46-47
• 致谢47

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