曲克芦丁对大鼠缺血性脑卒中后神经血管单元保护作用机制研究

发布时间：2020-05-25 07:38

【摘要】：目的:建立大鼠缺血性脑卒中动物模型,观察曲克芦丁脑蛋白水解物对大脑中动脉栓塞后大鼠神经血管单元的作用,探讨其可能的作用机制。方法:120只雄性SD大鼠,采用随机数字表法随机分成3组:假手术组(SHAM组,n=40)、大脑中动脉栓塞组(MCAO组,n=40)、MCAO+曲克芦丁给药组(n=40)。MCAO组参照何敏等改良法制备大鼠大脑中动脉栓塞永久模型,即将硅胶栓线通过颈总动脉,经过颈内动脉到达大脑中动脉开口处。MCAO+曲克芦丁给药组在MCAO术后立即腹腔注射曲克芦丁脑蛋白水解物注射液3ml/kg,3次/日,连用3 d,MCAO组给予相同剂量的生理盐水。分别于MCAO后1d、3d、7d、14d,每组各取10只大鼠,采用改良神经功能缺损评分(m NSS)评价神经功能的损伤程度。MCAO后3d,每组各取5只大鼠,进行7.0 T高分辨率核磁扫描,分别用T2序列和ASL序列表示梗死体积和梗死区域血流变化;每组各取10只大鼠,进行尼氏染色及免疫荧光染色,评价神经元的存活率、形态改变及小胶质细胞、星形胶质细胞、小胶质细胞、内皮细胞及血脑屏障紧密连接的表达;每组各取10只大鼠,采用Western blot法检测神经型一氧化氮合酶(n NOS)、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)及3-硝基酪氨酸(3-NT)的表达;上述脑组织,余下部分用于酶联免疫吸附剂测定(ELISA),采用ELISA法检测脑组织中一氧化氮(NO)的含量;每组各取5只大鼠,取半暗带部位脑组织,透射电镜观察血脑屏障紧密连接。结果:MCAO后3d、7d、14d出现严重的神经功能缺损,而MCAO+曲克芦丁给药组较MCAO组m NSS评分均显著降低;MCAO后3d,大脑中动脉供血区在磁共振成像T2序列上呈高信号,在ASL序列上显示血流信号减低,曲克芦丁治疗组与MCAO组相比,T2序列显示梗死体积显著下降,ASL序列显示血流信号显著增加;尼氏染色结果显示MCAO后神经元数量减少,细胞皱缩变形,曲克芦丁治疗组上述改变显著减轻;免疫荧光染色显示MCAO后半暗带小胶质细胞及星形胶质细胞增多,内皮细胞及血脑屏障的标记分子减少,曲克芦丁治疗组上述改变减少;透射电镜结果显示,MCAO后血脑屏障紧密连接破坏,微血管内皮细胞间出现明显空隙,曲克芦丁治疗组内皮细胞间空隙明显变小;蛋白电泳结果显示,MCAO后n NOS、i NOS、e NOS单体及3-NT均增多,曲克芦丁治疗组较MCAO组上述物质显著减少;ELISA结果显示,MCAO后NO含量明显下降,曲克芦丁治疗组NO含量显著增加。结论:曲克芦丁脑蛋白水解物可以通过减少n NOS、i NOS、e NOS单体的表达,增加NO而减少3-NT的产生,对大脑中动脉栓塞后大鼠神经血管单元产生保护作用。
【学位授予单位】：陕西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R743.3

【参考文献】