快速检测结核早期分泌性靶抗原6诊断结核感染的研究

发布时间：2017-03-26 16:00

  本文关键词：快速检测结核早期分泌性靶抗原6诊断结核感染的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:结核分枝杆菌(MTB)感染所致的结核病(TB)是世界上发病率、死亡率最高的传染病之一,其诊治仍然面临诸多困境。结核性脑膜炎(TBM)是最严重的肺外TB,而且其所占比例呈现增加趋势。早期、准确的检测一直是TBM诊治难以逾越的障碍,也是控制疾病和降低死亡率的关键。缺乏灵敏度(Se)和特异度(Sp)均高的检测方法和诊断金标准是早期诊断的最大困难。研究的目的是用免疫荧光染色(IF染色)、免疫细胞化学DAB染色(IC-DAB染色)和免疫细胞化学碱性磷酸酶染色(IC-AKP染色)检测脑脊液(CSF)细胞内的早期分泌性靶抗原6(ESAT-6)来诊断结核性脑膜炎(TBM),比较三种染色方法诊断的Se和Sp,寻找最有效的染色及诊断方法,为进一步研究提供指导和基础支持。方法:1.以公认的南非专家共识作为TBM确诊的标准。由临床症状结合病原学培养或改良抗酸染色(AFB染色)阳性确诊为TBM的患者组成病例组。对照组为非TBM患者,培养、改良AFB染色等结核相关检查阴性,确诊为隐球菌性脑膜炎、病毒性脑膜炎等。收集CSF标本病例组144份;对照组180份。对每份CSF细胞内的ESAT-6分别进行IF染色、IC-DAB染色和IC-AKP染色并阅片。记录每种染色每份标本的阳性细胞百分比。应用PASW statistics 18.0统计软件,分别绘制三种染色的ROC曲线。按照截断点原则得出每种染色诊断的Se、Sp、YI指数等。比较三种染色方法诊断TBM的Se、Sp等得出最有效的染色和诊断方法。2.病例组的144份CSF标本,应用IF染色和IC-DAB染色对CSF细胞内的ESAT-6进行染色。依据胞核及胞体形态判断细胞类型。记录两种染色方法200个细胞中性粒细胞、单核细胞及淋巴细胞的阳性细胞数。把两种染色方法得出的三种细胞类型的阳性细胞数分别进行配对t检验,比较两种染色方法三种不同细胞类型阳性细胞数的差异。3.筛选病例组中初次诊治,并且之前没有应用过抗结核及抗生素治疗的TBM患者的CSF标本70份作为研究对象。IF染色后,据胞核及胞体形态辨别淋巴细胞。以CSF阳性淋巴细胞比例50%和50%分组。治疗8周后应用改良Rankin评分(MRC)进行疗效评定。把MRC评分0-1的定为痊愈组,2-3的定为有效组,4-5的定为后遗症组。应用行×列表资料的χ2检验比较CSF阳性淋巴细胞比例50%和50%两组治疗效果痊愈、有效、后遗症的构成比。用两样本等级资料的秩转换非参数检验,比较不同组间的疗效。结果:1.三种染色方法ESAT-6表达阳性CSF细胞的胞浆中,IF染色可见绿色荧光,IC-DAB染色可见棕黄色或黄褐色颗粒,IC-AKP染色可见紫蓝色颗粒。三种染色方法分别绘制ROC曲线,计算曲线下面积分别为0.94、0.863和0.894。免疫荧光曲线下面积最大,诊断准确度最高,IC-DAB染色和IC-AKP染色准确度中等偏高。三种染色方法的截断点分别为10.0%、14.5%和10.5%。三种染色方法的Se分别为88.89%、83.3%和78.5%;Sp分别为93.33%、82.8%和91.1%。IF染色的Se和Sp均最高,IC-DAB染色的Se较IC-AKP染色高,IC-AKP染色的Sp较IC-DAB染色高。三种染色方法的阳性预测值(PV+)分别为91.43%、80.00%和78.47%;阴性预测值(PV-)分别为91.30%、86.21%和84.10%。IF染色的PV+最高说明假阳性率最低。IF染色的PV-最高说明假阴性率均低。阳性似然比(LR+)分别为13.33、4.84和8.82;阴性似然比(LR-)分别为0.12、0.20和0.24。Youden指数(YI指数)分别为82.22%、66.1%和69.6%。IF染色LR+高、YI指数高和LR-低表明应用IF染色的真实性最好。2.IF染色和IC-DAB染色检测中性粒细胞内ESAT-6差异有统计学意义,说明两种染色方法检测中性粒细胞的结果不同;两种染色方法对单核和淋巴细胞的差异没有统计学意义。3.对CSF阳性淋巴细胞比例50%和50%两组治疗效果痊愈、有效、后遗症的构成比比较,得出两组患者三种疗效的构成比不同。比较不同组间的疗效,得出阳性淋巴细胞比例50%组后遗症多于50%组,阳性淋巴细胞比例50%组痊愈的少于50%组。结论:本实验应用IF染色、IC-DAB染色和IC-AKP染色检测CSF细胞内ESAT-6来诊断TBM。三种染色方法均能检测出CSF细胞中ESAT-6表达阳性的细胞。三种方法中IF染色的Se及Sp最高,诊断的准确度最高。IF染色和IC-DAB染色检测ESAT-6对中性粒细胞结果不同;而检测单核和淋巴细胞无统计差异。IF染色和IC-DAB染色相比IF染色对中性粒细胞的准确度高。研究还表明CSF阳性淋巴细胞比例50%与50%患者的疗效构成比不同。研究也说明当阳性淋巴细胞比例50%的患者预后要好于比例50%的患者。因此IF染色检测细胞内ESAT-6是一种早期、有效、快速的检测结核感染的方法,是准确有效的诊断TBM的方法,为诊断、治疗、判断预后及进一步研究提供更多的指导与帮助。
【关键词】：结核性脑膜炎 早期分泌性靶抗原6 免疫荧光染色 免疫细胞化学DAB染色 免疫细胞化学AKP染色 诊断
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R529.3;R446.6
【目录】：

• 缩略语表4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-14
• 前言14-15
• 文献回顾15-33
• 第一部分 三种方法检测脑脊液细胞内ESAT-6 诊断结核性脑膜炎的研究33-45
• 1 材料33-34
• 2 方法34-37
• 3 结果37-42
• 4 讨论42-45
• 第二部分 荧光染色和DAB染色检测ESAT-6 三种阳性细胞的比较45-50
• 1 材料45
• 2 方法45-47
• 3 结果47-48
• 4 讨论48-50
• 第三部分 荧光染色检测阳性淋巴细胞与预后研究50-54
• 1 材料50
• 2 方法50-51
• 3 结果51-52
• 4 讨论52-54
• 小结54-56
• 参考文献56-64
• 个人简历和研究成果64-65
• 致谢65

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本文编号：269002