短暂性脑缺血发作对后续脑梗死影响及作用机制的初步探讨

发布时间：2017-03-27 15:08

  本文关键词：短暂性脑缺血发作对后续脑梗死影响及作用机制的初步探讨，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的:1、通过临床分析研究,初步探讨短暂性脑缺血发作(TIA)是否具有缺血预处理(IPC)作用,诱导后续脑梗死(CI)产生缺血耐受,对CI产生神经保护作用。2、通过检测CI患者不同时间点外周血单个核细胞(PBMCs)中过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)、核转录因子κB(NF-κB)、清道夫受体CD36等指标的表达及活性,探讨PPARγ、NF-κB在IPC过程中的表达变化及意义。研究方法:收集2014年11月~2015年9月于天津医科大学总医院神经内科住院的前循环CI患者113例。根据有无前驱TIA分为单纯CI组(CI组)87例、进展CI组(TIA-CI组)26例。选取36例与患者组基线特征相匹配、无脑血管病史者作为对照组。1、两组分别比较早期神经功能恶化(END)、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、三个月改良Rankin量表(m RS)评分、脑梗死体积、超敏C反应蛋白(hs-CRP)及其他相关危险因素。2、根据TIA持续时间(10min、10~20min、20min)、发作次数(1次、2~3次、3次)、首次发作至进展为CI的时间间隔(7d,7~14d,14d)将TIA-CI组分为不同亚组。比较END、NIHSS评分、m RS评分、hs-CRP。3、分别留取CI组及TIA-CI组患者发病后24h、3d、7d、12d及对照组的外周静脉血,提取PBMCs,进行如下检测:(1)Western Blot法检测不同时间点PBMCs中PPARγ、NF-κB表达水平;(2)免疫荧光染色法检测不同时间点PBMCs中PPARγ、NF-κB亚细胞定位;(3)流式细胞术测定不同时间点PBMCs中PPARγ靶基因CD36的表达水平。研究结果:1、临床研究:与CI组比较,TIA-CI组发生END比例(11.5%vs31.0%)、出院NIHSS评分[(1.85±2.31)vs(3.30±3.65)]、3个月m RS评分[(0.90±0.83)vs(1.78±1.77)]、hs-CRP[(2.52±3.23mg/L)vs(6.21±3.23mg/L)]、脑梗死体积[(3.92±8.05cm3)vs(9.15±15.07cm3)]均显著减小(P0.05);脑梗死前7~14d内发生2~3次、持续10min TIA患者END比例、出院NIHSS评分、3个月m RS评分、hs-CRP的变化最为显著;hs-CRP与END(r=0.311,P0.05)、入院NIHSS评分(r=0.455,P0.01、出院NIHSS评分(r=0.557,P0.01)、3个月m RS(r=0.534,P0.01)、脑梗死体积(r=0.524,P0.01)正相关。2、实验研究(1)PPARγ表达及活性1)PPARγ表达检测:采用Western Blot法检测PBMCs中PPARγ总蛋白表达。与对照组相比,梗死24h时,CI组、TIA-CI组PPARγ表达有所下降,但与对照组间差异均无统计学意义(t=0.830,P0.05;t=1.804,P0.05);自梗死3d起,两患者组PPARγ表达均呈梗死时间依赖性增加,且两组间各时间点PPARγ表达差异无统计学意义(t=0.871,P0.05;t=0.587,P0.05;t=0.436,P0.05)。两患者组PPARγ表达均呈先下降后上升趋势,且两组间表达差异无统计学意义。2)PPARγ活性检测:(1)PPARγ亚细胞定位检测:采用免疫荧光法检测。对照组PPARγ大部分位于胞浆内,处于失活状态。与对照组相比,TIA-CI组随梗死时间(24h,3d,7d,12d)延长,PPARγ在胞浆内表达逐渐减少,胞核内聚集逐渐增多(即PPARγ核移位),提示PPARγ被激活。CI组于梗死24h、3d出现PPARγ核移位,其分布与TIA-CI组无明显差别;自梗死7d开始,与TIA-CI组相比,CI组PPARγ在胞核内聚集减少,胞浆中表达增多,提示PPARγ活性下降。TIA-CI组PPARγ活性呈梗死时间依赖性增加,CI组PPARγ则仅在梗死初期活性增加。与CI组相比,TIA-CI组更多PPARγ处于激活状态且活性持续时间更长。(2)PPARγ靶基因CD36检测:采用流式细胞术检测。与对照组比较,TIA-CI组CD36表达呈梗死时间(24h,3d,7d,12d)依赖性增加,差异具有统计学意义(t=9.198,P0.01;t=13.48,P0.01;t=17.22,P0.01;t=6.096,P0.01);CI组CD36表达在梗死24h、3d、7d逐渐增加,差异具有统计学意义(t=6.012,P0.01;t=9.003,P0.01;t=11.62,P0.01),12d表达开始显著下降,与7d比较差异有统计学意义(t=5.063,P0.01),但仍高于对照组(t=5.477,P0.01)。两患者组CD36表达均高于对照组,TIA-CI组呈持续增加趋势,CI组则呈先增加后降低。两患者组间比较,梗死24h、3d、7d时CD36表达差异虽无统计学意义(t=0.106,P0.05;t=0.764,P0.05;t=0.257,P0.05),但TIA-CI组各时间点表达水平均高于CI组;12d时TIA-CI组CD36表达明显高于CI组,差异有统计学意义(t=4.147,P0.05)。与CI组相比,TIA-CI组CD36高水平表达的持续时间更长。(2)NF-κB(p65亚基)表达及活性1)NF-κB表达检测:采用Western Blot法检测PBMCs中NF-κB总蛋白表达。(1)与对照组相比:CI组、TIA-CI组梗死24h、3d时NF-κB表达均明显增加,差异具有统计学意义(CI组vs对照组:t=3.959,P0.05;t=4.838,P0.05;TIA-CI组vs对照组:t=4.039,P0.05;t=5.003,P0.01);TIA-CI组梗死7d、12d时NF-κB表达下降至低于对照组水平,差异具有统计学意义(t=5.931,P0.01;t=4.838,P0.01);CI组梗死7d时NF-κB表达下降至接近对照组水平,差异无统计学意义(t=2.771,P0.05),12d时明显低于对照组,差异有统计学意义(t=4.933,P0.05)。两患者组NF-κB表达均呈先上升后下降趋势,TIA-CI组下降速度快于CI组。(2)两患者组相比:TIA-CI组梗死24h、3d、7d、12d时NF-κB表达均低于CI组,差异有统计学意义(t=1.754,P0.05;t=1.858,P0.05;t=0.609,P0.05;t=0.519,P0.05)。2)NF-κB活性检测:采用免疫荧光法检测NF-κB亚细胞定位。对照组NF-κB大部分位于胞浆内,处于失活状态。与对照组相比,梗死24h、3d时TIA-CI组、CI组NF-κB均发生核移位,提示NF-κB活性增加;7d、12d时,TIA-CI组NF-κB在胞核中聚集减少,大部分位于胞浆内,而CI组NF-κB仍大部分位于胞核内。与CI组相比,TIA-CI组NF-κB的活化状态持续时间较短。研究结论:1、前驱TIA发作具有IPC作用,卒中前7~14天内发生2~3次、持续10min的TIA保护作用更为突出;2、前驱TIA发作可能通过上调PPARγ活性、抑制NF-κB表达并加速其失活,以减轻机体炎症反应,从而对后续梗死发挥保护作用。
【关键词】：短暂性脑缺血发作 脑梗死 IPC PPARγ NF-κB CD36
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R743.33
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-13
• 缩略语/符号说明13-14
• 前言14-17
• 研究现状、成果14-16
• 研究目的、方法16-17
• 一、TIA对后续CI的影响17-25
• 1.1 资料与方法17-19
• 1.1.1 研究对象17-18
• 1.1.2 分组及评分方法18
• 1.1.3 统计学方法18-19
• 1.2 结果19-22
• 1.2.1 2 组危险因素比较19
• 1.2.2 2 组相关评分、脑梗死体积、hs-CRP比较19-20
• 1.2.3 TIA-CI亚组相关评分及hs-CRP比较20-21
• 1.2.4 相关性分析21-22
• 1.3 讨论22-25
• 1.3.1 TIA对后续CI的影响22-23
• 1.3.2 不同发作特点TIA对后续CI的影响23
• 1.3.3 hs-CRP表达变化23-24
• 1.3.4 结论24-25
• 二、TIA对后续CI外周血单个核细胞PPARγ、NF-κB p65表达的影响25-51
• 2.1 对象和方法25-34
• 2.1.1 研究对象25
• 2.1.2 外周静脉血采集25
• 2.1.3 主要实验仪器设备25-26
• 2.1.4 主要实验耗材及试剂26-29
• 2.1.5 实验方法29-34
• 2.1.6 统计学方法34
• 2.2 结果34-46
• 2.2.1 PPARγ 表达及活性34-41
• 2.2.1.1 PPARγ 表达检测34-36
• 2.2.1.2 PPARγ 活性检测36-41
• 2.2.2 NF-κB表达及活性41-46
• 2.2.2.1 NF-κB表达检测41-43
• 2.2.2.2 NF-κB活性检测43-46
• 2.3 讨论46-51
• 2.3.1 脑缺血损伤后炎性损伤及外周血炎症细胞募集46-47
• 2.3.2 IPC脑保护机制47-48
• 2.3.3 IPC中PPARγ表达及活性变化48-51
• 全文结论51-52
• 参考文献52-61
• 发表论文和参加科研情况说明61-62
• 综述 IPC诱导脑保护作用的机制62-70
• 综述参考文献66-70
• 致谢70-71
• 个人简历71

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