内源性硫化氢上调Nav1.7电压门控钠通道参与神经病理性疼痛

发布时间：2020-06-27 19:46

【摘要】：目的:探讨背根神经节(Dorsal Root Ganglion,DRG)神经元上,内源性硫化氢(Hydrogen sulfide,H_2S)调节电压门控钠通道1.7(Nav1.7)的内在机制,并阐明其在神经病理性疼痛疾病过程中发挥的作用。方法:本研究以Sprague-Dawley(SD)大鼠为研究对象,建立神经病理性疼痛模型——坐骨神经分支选择性损伤模型(Spared Nerve Injury,SNI),并运用免疫荧光技术和Western blot技术检测造模前后L_4-L_6 DRG神经元上,内源性H_2S合成酶——胱硫醚β-合成酶(Cystathionineβ-Synthetase,CBS)和Nav1.7蛋白表达变化。运用Western blot技术检测阻断剂对L_4-L_6 DRG神经元中CBS,MEK/ERK,磷酸化MEK/磷酸化ERK(pMEK/pERK)和Nav1.7蛋白表达的影响。运用全细胞膜片钳技术检测L_4-L_6 DRG神经元兴奋性指标在造模和给予阻断剂前后的变化。运用Hargreave’s实验和丙酮实验检测大鼠造模及给予阻断剂前后的伤害性行为变化。结果:(1)免疫荧光和结果显示,与Sham组相比,SNI+Vehicle组在造模后第7天,第14天和第21天DRG神经元中CBS和Nav1.7的表达均增加(p0.05,n=6)。(2)Western blot实验结果显示,与Sham组相比,SNI+Vehicle组在造模后第7天,第14天和第21天DRG神经元中CBS和Nav1.7的表达均增加(p0.05,n=6),并且在造模后第21天最明显。(3)CBS阻断剂AOAA可抑制SNI造模诱导的CBS,pMEK1/2,pERK1/2和Nav1.7蛋白表达的增加(p0.05,n=6),而Nav1.7特异性阻断剂PF-04856264不能抑制SNI诱导的CBS,pMEK,pERK和Nav1.7蛋白表达增加(p0.05,n=6)。此外,MEK阻断剂U0126能抑制SNI诱导的pMEK,pERK和Nav1.7蛋白表达的增加(p0.05,n=6),但不能抑制SNI造模诱导的CBS增加(p0.05,n=6)。(4)膜片钳实验结果显示,SNI造模后DRG神经元上动作电位基强度降低且动作电位频数增加(p0.001,n=8)。(5)运用阻断剂AOAA(p0.001,n=8),U0126(p0.001,n=8)和PF-04856264(p0.001,n=8)均可显著抑制SNI造模引起的动作电位基强度降低和动作电位频数的增加。(6)行为学实验结果表明,SNI造模后各组间热刺激缩足潜伏期没有显著差异(F=0.130,p=0.9410.05,n=6)。此外,与Sham组相比,SNI+Vehicle组中冷刺激抬足时间显著增加(F=924.429,p0.001,n=6)。给予CBS阻断剂AOAA(F=64.280,p0.001,n=6),MEK阻断剂U0126(F=46.196,p0.001,n=6)和Nav1.7特异性阻断剂PF-04856264(F=24.021,p0.01,n=6)后,抬足时间均显著降低。结论:内源性H_2S激活MEK/ERK信号通路,上调Nav1.7通道从而参与神经病理性疼痛的发生,Nav1.7通道有望成为神经病理性疼痛疾病的治疗靶点。
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R741
【图文】：

大鼠坐骨神经周围解剖结构示意图

内源性硫化氢上调Nav1.7电压门控钠通道参与神经病理性疼痛

倒置相差显微镜镜下的DRG神经元Figure2.InvertedphasecontrastmicroscopyofDRGneurons

【参考文献】