人参皂苷Rh2对神经母细胞瘤SH-SY5Y的生物学行为的影响

发布时间：2020-07-13 14:33

【摘要】：目的:神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)具有早期易转移的特性,是影响儿童早期肾上腺髓质及椎旁交感神经节正常发展的胚胎性恶性肿瘤。根据以往的综述及研究已经发现人类神经母细胞瘤的部分分子生物学特性,主要覆盖了异常的基因组研究和转录组水平研究。神经母细胞瘤几乎可以发生在交感神经系统的任何地方,从近期公布的国际大型患者队列研究的数据表明,神经母细胞瘤常发生在肾上腺(47%)、腹腔/腹膜后区域(24%)、颈部(3%)、胸部(15%)、骨盆(3%)和其他地区(8%)。人参皂苷Rh2(ginsenoside Rh2)作为人参中的关键活性成分,近年来已引起广泛重视,现已研究发现其在人类多种肿瘤中均具有较强的抑制肿瘤活性。目前国内外相关研究发现人参皂苷Rh2在多种肿瘤细胞中抑制肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭并诱导细胞凋亡以及其在肿瘤微环境中的作用。人参皂苷Rh2在神经母细胞瘤的应用尚未见报道。因此本文研究人参皂苷Rh2(ginsenoside Rh2)对神经母细胞瘤的增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。研究方法:用(0、5、10、20、40、80μg/ml)浓度人参皂苷Rh2来干预人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y。细胞增殖测试实验采用Cell counting kit-8(CCK-8)法检测人参皂苷Rh2作用神经母细胞瘤SH-SY5Y增殖的影响;细胞迁移实验采用划痕试验检测、Transwell小室模型检测人参皂苷Rh2处理神经母细胞瘤SH-SY5Y侵袭能力;蛋白质印迹法(Western-bolt,WB)试验检测神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞内基质金属蛋白酶2(MMP2)、Bax、Bcl-2、β-catenin蛋白的表达。结果:人参皂苷Rh2可以时间-浓度依赖性地抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系增殖。在CCK-8结果中,24小时表现为轻微细胞毒性,48小时表现为显著毒性;人参皂苷Rh2可以抑制神经母细胞瘤迁移及侵袭;蛋白质印迹法显示人参皂苷Rh2降低迁移相关蛋白MMP2的表达,上调了促凋亡蛋白Bax的表达水平同时也降低了抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。人参皂苷Rh2处理的神经母细胞瘤内β-catenin水平降低。结论:1.人参皂苷Rh2可以在体外抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y的增殖,诱导其凋亡抑制其迁移及侵袭;2.人参皂苷Rh2下调MMP2蛋白抑制肿瘤细胞迁移及侵袭,通过wnt通路中β-catenin蛋白抑制细胞生长。
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.4
【图文】：

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中国医科大学硕士学位论文3 结果 Rh2 体外抑制神经母细胞瘤 SH-SY5Y 增殖：图 1 所示，人参皂苷 Rh2 可以时间-浓度依赖性地抑Y 细胞体外增殖，在 CCK-8 实验中，我们选择 24、48 对人神经母细胞瘤 SH-SY5Y 细胞的时间点，在 24 小时母细胞瘤 SH-SY5Y 细胞的 IC50为 504.4μg，表现为轻皂苷 Rh2 对人神经母细胞瘤 SH-SY5Y 细胞的 IC50为 3

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中国医科大学硕士学位论文3.2 人参皂苷 Rh2 体外抑制神经母细胞瘤 SH-SY5Y 迁移结果显示：人参皂苷 Rh2 可以时间-浓度依赖性地抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y 细胞的体外迁移。迁移比率以[（初始距离-24 小时后距离）/初始距离]*100%表示，对照组为 83.54%、实验组分别为 79.47%、74.91%、61.58%、42.97%、30.44%。图2显示，人参皂苷Rh2具有抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞体外迁移的能力。

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中国医科大学硕士学位论文3.3 人参皂苷 Rh2 体外抑制神经母细胞瘤 SH-SY5Y 侵袭结果显示：在 Transwell 小室侵袭模型试验中，人参皂苷 Rh2 抑制人神经母细胞瘤细胞系 SH-SY5Y 的体外侵袭能力。侵袭能力的判断以穿过 Transwell 下室表面细胞数目表示，侵袭率为（实验组下室表面细胞/对照组下室表面细胞）*100%，实验组分别为 97.32%、82.22%、72.47%、61.95%、33.84%。图 3 显示在人参皂苷 Rh2干预后侵袭数目的变化。

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