ALKBH5促进人脑胶质瘤细胞前神经-间质转化的作用及机制

发布时间：2020-08-09 12:43

【摘要】：目的:本研究旨在探讨烷基化修复同源蛋白5(a-ketoglutarate-dependent dioxygenase alk B homolog 5,ALKBH5)在人脑胶质瘤细胞侵袭及前神经-间质转化中的作用及其机制。方法:(1)检索中国人脑胶质瘤基因组学数据库(Chinese Glioma Genome Altas,CGGA)和人类蛋白质图谱数据库(The Human Protein Atlas),分析脑胶质瘤组织ALKBH5的表达与临床病理分级、分子分型和预后的关系;(2)利用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测四种常见人脑胶质瘤细胞株中ALKBH5的差异表达;(3)在相对高表达的脑胶质瘤细胞中干扰ALKBH5,在相对低表达的脑胶质瘤细胞中过表达ALKBH5,用CCK-8法和成克隆实验检测ALKBH5干扰或者过表达对脑胶质瘤细胞增殖和克隆形成能力的影响;Transwell试验评价ALKBH5干扰或者过表达前后脑胶质瘤细胞的迁移和侵袭能力;并用Western blot检测相应的前神经-间质转化标志物E-cadherin、N-cadherin、OLIG2、YKL-40、Vimentin和Met的表达,以及AMPK/m TOR信号通路相关蛋白的表达。结果:(1)临床数据库分析结果表明脑胶质瘤病理分级越高,ALKBH5的表达水平也越高,且其在间质型脑胶质瘤中表达高于前神经元型,与患者总体生存期呈负相关;(2)sh-ALKBH5能够显著抑制U87MG和U251MG细胞中ALKBH5的表达,3x Flag-ALKBH5能够显著增强LN229和SW1783细胞中ALKBH5的表达;(3)下调ALKBH5抑制了U87MG和U251MG细胞的增殖、迁移和侵袭能力,前神经型标志物E-cadherin、OLIG2表达增加,间质表型标志物N-cadherin、Met和YKL-40表达降低,p-m TOR、p-Raptor蛋白表达降低;而在LN229和SW1783细胞中过表达ALKBH5的作用与之相反,前神经型标志物E-cadherin、OLIG2表达降低,间质表型标志物N-cadherin、Met和YKL-40表达增加,同时p-AMPK、p-TSC2蛋白表达增加。结论:(1)脑胶质瘤组织ALKBH5表达与病理分级呈正相关,与患者的生存期呈负相关;(2)ALKBH5增强了肿瘤增殖、迁移和侵袭的能力,且促进了前神经-间质转化;(3)ALKBH5可能通过调控AMPK/m TOR通路影响脑胶质瘤细胞的前神经-间质转化。
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.41
【图文】：

图 1.1.3 m6A RNA 甲基化在癌症中的多重功能。m6A RNA 甲基化在癌症的发生和发展过程中发挥多种功能。中间的圆圈代表 m6ARNA 甲基化的可逆过程，在调节 CSC 的多能性、肿瘤细胞增殖，肿瘤转移和肿瘤免疫方面发挥关键作用。m6ARNA 甲基化通过不同的机制在多种癌症中发挥这四个方面的作用[50]。Fig 1.1.3 Multiple functions of m6A RNA methylation in cancer. m6A RNA methylation exertsmμLtiple functions in cancer initiation and progression. The circle in the middle represents thereversible process of m6A RNA methylation, which plays a pivotal role in modμLating CSCpluripotency, cancer proliferation, cancer metastasis, and tumor immunity. Distinct mechanismsthrough which m6A RNA methylation exerts these four aspects of functions in various types ofcancers are shown in a graphical form in this picture.CSCs 可能被证明能够再生肿瘤，代表了一个自我更新的细胞库，这些细胞会引发多种类型的癌症[52,53]。造血干细胞(HSCs)具有明确的发育轨迹，可以监测和量化其分化，为探索分化状态提供了一个理想的模型系统，分化异常或分化受

2技术路线

图 2.4.1 脑胶质瘤组织 ALKBH5 mRNA 表达与临床病理分级呈正相关A：不同等级脑胶质瘤中 ALKBH5 mRNA 的表达；B：各亚型脑胶质瘤中 ALKBH5 mRNA的表达。Fig2.4.1ALKBH5 expression in gliomas was positively correlated with clinical pathologyclassificationA: The mRNA levels of ALKBH5 in different grades of gliomas ; B: The mRNA levels ofALKBH5 in subtypes of glioblastoma.2.4.2 脑胶质瘤组织中 ALKBH5 mRNA 表达与患者生存期呈负相关通过检索中国人脑胶质瘤基因组图谱计划数据库 (CGGA) 的脑胶质瘤患者的临床相关数据，探索 ALKBH5 表达与脑胶质瘤患者之间的相关性。结果表明，ALKBH5 高表达的脑胶质瘤患者的生存期远远低于 ALKBH5 低表达的脑胶质瘤

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本文编号：2787132