在外周炎症诱导中枢免疫激活的过程中大鼠中脑内TET2蛋白的变化及其与IL-6表达的相关性分析
发布时间：2020-08-12 21:42
【摘要】：目的:探究大鼠中脑内TET2蛋白是否参与外周炎症诱导中枢免疫激活的过程以及其与中脑内IL-6等炎症因子表达的关系。研究方法:将雄性SD大鼠随机分为正常对照组(N组)、外周炎症组(A组)和耗竭外周单核细胞组(B组)。N组不做任何预处理,A组一次性大剂量(5mg/kg)腹腔注射LPS诱发外周炎症,B组鼠尾静脉注射氯膦酸二钠脂质体耗竭外周单核细胞后腹腔注射等剂量LPS。分别于注射药物后0.5小时、2小时、1天、7天杀鼠取中脑组织提取蛋白及RNA,并制作冰冻脑切片。RT-qPCR法检测IL-6、IL-1β、TNF-α等炎症因子的mRNA水平。免疫荧光双染色检测中脑内小胶质细胞形态和数量及TET2蛋白表达情况。Western Blot法进行TET2蛋白表达的相对定量分析。结果:1.与正常对照组(N组)相比,一次性大剂量腹腔注射LPS诱发外周炎症后(A组)大鼠中脑内小胶质细胞的数量明显增多,其形态从静息状态转变为阿米巴样的激活状态;中脑内IL-6、IL-1β、TNF-α等炎症因子的表达呈随时间变化的明显增高趋势,均于1天达高峰(P0.05),后于7天下降。2.与A组相比,耗竭外周单核细胞组(B组)大鼠中脑内小胶质细胞的数量明显少于A组,且激活状态明显减轻;中脑内IL-6、IL-1β、TNF-α等炎症因子的表达呈相对平稳的轻度增高趋势,在各对应时间点上均明显低于A组(P0.05),且峰值明显减低(P0.05)。3.与N组相比,A组大鼠中脑内TET2蛋白的表达呈轻度降低趋势,于1天时达最低点至N组的0.50±0.06倍(P0.05),于7天缓慢回升至N组水平;与N组相比,B组大鼠中脑内TET2蛋白的表达呈明显增高趋势,于2小时点达最高值(约为N组的1.89±0.32倍,P0.05),后于7天缓慢回降至N组水平;B组在各时间点上TET2蛋白的表达始终明显高于A组(P0.05)。4.通过对中脑内TET2蛋白表达与IL-6、TNF-α、IL-1βmRNA表达的简单相关性分析得,TET2蛋白的变化分别与IL-6、TNF-α、IL-1βmRNA的变化呈负相关(P0.05),相关系数分别为r=-0.603,r=-0.485,r=-0.407。结论:外周炎症可以引起大鼠中脑内免疫激活,且外周血单核细胞的缺失可以减轻由外周炎症诱发的脑内炎症状态。大鼠中脑内表达的TET2蛋白参与外周炎症诱导中枢免疫激活的过程,并在不同的炎症状态下呈现不同的变化趋势:外周炎症诱导的脑内低炎症状态存在TET2蛋白时间依存的表达增高;而外周炎症诱导的脑内高炎症状态存在TET2蛋白的减低。TET2蛋白与IL-6、TNF-α、IL-1β等促炎性因子的表达呈相反变化趋势。TET2可能是负性调控脑内炎症状态的重要因素之一。
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R742.5
【图文】：
3.1 大鼠中脑内 IL-6、IL-1β、TNF-α等炎症因子的表达3.1.1 腹腔注射 LPS 可使大鼠中脑内炎症因子的表达明显增高图 1、2、3 分别为 RT-qPCR 法检测大鼠中脑内 IL-6、IL-1β、TNF-α的 mRNA相对表达情况。从图中可见，A 组大鼠中脑内 IL-6、IL-1β、TNF-α的 mRNA 的相对表达在不同时间点均明显高于 N 组（健康对照组）（P<0.05），且呈随时间进展的迅速且剧烈的递增趋势，于 1 天达高峰（P<0.05），后于 7 天呈缓慢下降趋势。证实了腹腔注射 LPS 后，大鼠脑内炎症因子出现明显增高过程。3.1.2 耗竭外周单核细胞可明显降低由腹腔注射 LPS 引起的中脑内炎症因子表达从图 1、2、3 分别可见，与 N 组相比，B 组大鼠中脑内 IL-6、IL-1β、TNF-α的 mRNA 的表达呈相对平稳的轻度增高趋势，并且在相对应时间点上均明显低于 A组，且峰值明显减低（P<0.05）。
14图 3 不同条件下大鼠中脑内 TNF-α mRNA 的相对表达3.2 大鼠中脑内小胶质细胞的数量及形态3.2.1 腹腔注射 LPS 可使大鼠中脑内小胶质细胞明显激活组图 4 为大鼠中脑免疫荧光染色结果。图（A、D、G）中的绿色荧光为大鼠中脑内小胶质细胞 IBa-1 的免疫荧光染色；其中，图（A）为正常未注药的大鼠中脑小胶质细胞 IBa-1 的免疫荧光染色，图（D）为腹腔注射 LPS 1 天的大鼠中脑小胶
中国医科大学硕士学位论文质细胞 IBa-1 的免疫荧光染色。从图（A）可见正常大鼠中脑内小胶质细胞的数量少且处于未激活状态；从图（D）中可见腹腔注射 LPS 1 天后大鼠中脑小胶质细胞IBa-1 的数量明显增多，并且形态呈杂乱无章的阿米巴样激活状态，证实了外周注射 LPS 引起的外周炎症诱发了脑内小胶质细胞的明显活化。比例尺均为 100μm。3.2.2 耗竭外周单核细胞可明显减轻由腹腔注射 LPS 引起的中脑内小胶质细胞活化组图 4 的图（G）中绿色荧光为耗竭外周单核细胞后腹腔注射 LPS 1 天的大鼠中脑内小胶质细胞 IBa-1 的免疫荧光染色。从图（G）可见：与图（D）相比，B 组小胶质细胞 IBa-1 的数量相对减少且激活状态相对减轻；但与图（A）相比，B 组小胶质细胞 IBa-1 的数量仍比 N 组多。说明了耗竭外周单核细胞可明显减轻由腹腔注射 LPS 引起的中脑内小胶质细胞活化。比例尺均为 100μm。正常
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R742.5
【图文】：
3.1 大鼠中脑内 IL-6、IL-1β、TNF-α等炎症因子的表达3.1.1 腹腔注射 LPS 可使大鼠中脑内炎症因子的表达明显增高图 1、2、3 分别为 RT-qPCR 法检测大鼠中脑内 IL-6、IL-1β、TNF-α的 mRNA相对表达情况。从图中可见，A 组大鼠中脑内 IL-6、IL-1β、TNF-α的 mRNA 的相对表达在不同时间点均明显高于 N 组（健康对照组）（P<0.05），且呈随时间进展的迅速且剧烈的递增趋势，于 1 天达高峰（P<0.05），后于 7 天呈缓慢下降趋势。证实了腹腔注射 LPS 后，大鼠脑内炎症因子出现明显增高过程。3.1.2 耗竭外周单核细胞可明显降低由腹腔注射 LPS 引起的中脑内炎症因子表达从图 1、2、3 分别可见，与 N 组相比，B 组大鼠中脑内 IL-6、IL-1β、TNF-α的 mRNA 的表达呈相对平稳的轻度增高趋势，并且在相对应时间点上均明显低于 A组，且峰值明显减低（P<0.05）。
14图 3 不同条件下大鼠中脑内 TNF-α mRNA 的相对表达3.2 大鼠中脑内小胶质细胞的数量及形态3.2.1 腹腔注射 LPS 可使大鼠中脑内小胶质细胞明显激活组图 4 为大鼠中脑免疫荧光染色结果。图（A、D、G）中的绿色荧光为大鼠中脑内小胶质细胞 IBa-1 的免疫荧光染色；其中，图（A）为正常未注药的大鼠中脑小胶质细胞 IBa-1 的免疫荧光染色，图（D）为腹腔注射 LPS 1 天的大鼠中脑小胶
中国医科大学硕士学位论文质细胞 IBa-1 的免疫荧光染色。从图（A）可见正常大鼠中脑内小胶质细胞的数量少且处于未激活状态；从图（D）中可见腹腔注射 LPS 1 天后大鼠中脑小胶质细胞IBa-1 的数量明显增多，并且形态呈杂乱无章的阿米巴样激活状态，证实了外周注射 LPS 引起的外周炎症诱发了脑内小胶质细胞的明显活化。比例尺均为 100μm。3.2.2 耗竭外周单核细胞可明显减轻由腹腔注射 LPS 引起的中脑内小胶质细胞活化组图 4 的图（G）中绿色荧光为耗竭外周单核细胞后腹腔注射 LPS 1 天的大鼠中脑内小胶质细胞 IBa-1 的免疫荧光染色。从图（G）可见：与图（D）相比，B 组小胶质细胞 IBa-1 的数量相对减少且激活状态相对减轻；但与图（A）相比，B 组小胶质细胞 IBa-1 的数量仍比 N 组多。说明了耗竭外周单核细胞可明显减轻由腹腔注射 LPS 引起的中脑内小胶质细胞活化。比例尺均为 100μm。正常
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本文编号：2791060
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