hsa-miR-206靶向调控PPIB抑制胶质瘤生长的机制研究

发布时间：2020-08-13 20:36

【摘要】：背景:胶质瘤属于人类高度恶性肿瘤之一,其侵袭性强,容易复发。WHO分级Ⅳ级的胶质瘤(即GBM)预后中位生存期只有14个月左右,尽管采取手术全切合并术后放、化疗,但其预后仍很差。胶质瘤疗效欠佳是因为其对周围组织的广泛浸润及胶质瘤细胞的过度增殖。因此,通过分子层面,对胶质瘤发生过程中的具体信号通路研究成为目前广为关注的热点。MicroRNAs是一类长度约为18-25个核苷酸的非编码的调控性小RNA分子,其在转录后水平通过mRNA剪切或抑制蛋白质翻译的方式负向调控靶基因。MicroRNAs在多种肿瘤(如乳腺癌、卵巢癌、胃癌、胶质瘤等)的组织中均稳定表达,并参与调控这些肿瘤的生理和病理过程。因此,我们设想,MicroRNAs可能会是人类肿瘤潜在的治疗靶点。目的:(1)分析MicroRNAs在胶质瘤中的表达情况,筛选出差异表达的miRNA,并分析其与胶质瘤患者的预后关系。(2)探究hsa-miR-206在胶质瘤细胞生长过程中的生物学作用。(3)探究hsa-miR-206在体内影响胶质瘤发展的具体机制。方法:(1)对NCBI GEO数据库内的胶质瘤数据进行生物信息学分析,筛选出显著差异表达的miRNA,并通过qRT-PCR检测目的miRNA在各级别胶质瘤及正常脑组织中的表达量是否存在差异,并用Kaplan-Meier分析目的miRNA与胶质瘤患者预后之间的关系。(2)用hsa-miR-206 mimic转染人胶质母细胞瘤细胞株U251,并用qRT-PCR检测转染后U251细胞中hsa-miR-206的表达量。再通过CCK-8实验、流式细胞术、Transwell实验、细胞划痕实验来探讨hsa-miR-206对U251细胞增殖、侵袭、迁移以及凋亡的影响。(3)通过生物信息学网站预测hsa-miR-206的下游靶基因,并用荧光素酶试验及Western blot实验进行验证。构建裸鼠皮下移植瘤模型及大鼠颅内原位胶质瘤模型,进一步探讨hsa-miR-206在体内及脑内环境下对胶质瘤增殖的影响及其分子机制。结果:(1)对GEO数据库进行筛选之后,得到差异表达miRNA,即hsamiR-206,其在胶质瘤组织中的表达量显著高于正常脑组织,且各级别胶质瘤之间的表达量也存在差异。Kaplan-Meier分析结果显示,胶质瘤患者组织中hsamiR-206的表达量与生存期显著相关(p㩳0.01),hsa-miR-206低表达的患者预后较差,而hsa-miR-206高表达的患者预后相对较好,表明hsa-miR-206可能是胶质瘤患者潜在的预后生物学标志物。(2)过表达hsa-miR-206,能够显著抑制U251细胞增殖、侵袭及迁移,并促进细胞凋亡。(3)通过生物信息学方法预测到hsa-miR-206所调控的潜在靶基因为PPIB,用荧光素酶实验及Western blot实验进行验证,与预测的靶基因相一致。在裸鼠皮下移植瘤模型以及大鼠颅内原位胶质瘤模型中,过表达hsa-miR-206会显著抑制肿瘤的增殖。对其机制进一步研究,得出hsa-miR-206可能是通过靶向调控PPIB来发挥抑瘤作用。结论:综上所述,本研究得出hsa-miR-206在人胶质瘤组织中下调表达,且与胶质瘤患者的预后密切相关,可能是胶质瘤患者潜在的预后生物标志物。hsamiR-206不仅在体外抑制胶质瘤细胞的增殖、侵袭及迁移,促进其凋亡,在体内也能够抑制胶质瘤的生长,且hsa-miR-206可能是通过靶向调控PPIB来发挥抑瘤作用。因此,hsa-miR-206靶向调控PPIB这一信号通路对胶质瘤的靶向治疗提供了可能。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.41
【图文】：

热图,胶质瘤,聚类

计学分析 Graphpad Prism 7.00 和 SPSS 24 统计软件进行数据分析，数据用平均的方式来表示。两组间数据差异用独立样本 T 检验进行分析，Kaplan-M者总生存期和无进展生存期进行分析。当 p 值<0.05 时认为具有统计学验结果质瘤中 hsa-miR-206 存在差异表达胶质瘤 GEO 数据库进行筛选，从而得出差异表达 miRNA，并对 miR瘤中的表达量进行聚类热图（图 1-1）。其中绿框表示在该组织中的表平均水平，而红框则表示该组织中的表达量高于平均水平。因此，可以质瘤组织中 hsa-miR-206 存在差异表达。且目前对 hsa-miR-206 与胶质研究很少，故筛选 hsa-miR-206 作为本研究的研究对象。

胶质瘤,患者预后,患者,生物标志物

hsa-miR-206 在胶质瘤以及正常脑组织中的相对表达低表达与预后不良相关分析结果显示，胶质瘤患者组织中 hsa-miR-2060.01），hsa-miR-206 低表达的患者往往预后较差预后较好，生存期明显较长（图 1-3）。该结果瘤患者预后相关的生物标志物。

患者预后,胶质瘤

图 1-2 hsa-miR-206 在胶质瘤以及正常脑组织中的相对表达量1.63 hsa-miR-206 低表达与预后不良相关Kaplan-Meier 分析结果显示，胶质瘤患者组织中 hsa-miR-206 的表达量与生存期显著相关（p㩳0.01），hsa-miR-206 低表达的患者往往预后较差，而 hsa-miR-206 高表达的患者预后较好，生存期明显较长（图 1-3）。该结果表明 hsa-miR-206 可以作为胶质瘤患者预后相关的生物标志物。

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